ПРАВИЛА ПОЛЬЗОВАНИЯ ФАРМАКОПЕЙНЫМИ СТАТЬЯМИ 20 страница

Магния хлорида 1,4 г

Калия сульфата двузамещенного 10,0 г

Цетримида (цетилпиридиния бромида) 0,3 г

Агара 13,6 г

Глицерина 10,0 мл

Воды очищенной 1000 мл

pH после стерилизации 7,2 +/- 0,2

Отечественная среда для выделения синегнойной палочки - ЦПХ-агар для

выделения синегнойной палочки, сухая.

- ЦПХ-агар

Пептона сухого ферментативного 20,0 г

Калия сернокислого 7,6 г

Магния сернокислого семиводного 2,4 г

Соды кальцинированной 1,0 г

Фенозан-кислоты 0,2 г

ЦПХ (N-цетилпиридиния хлористого 1-водного) 0,3 г

Агара 8 г

Воды очищенной 1000 мл

рН 7,2 +/- 0,2

Среду не стерилизуют.

- Агар для выявления пиоцианина Pseudomonas (Pseudomonas Agar

Medium for Detection of Pyocyanin)

Панкреатического гидролизата желатина 20,0 г

Магния хлорида безводного 1,4 г

Калия сульфата безводного 10,0 г

Агара 15,0 г

Глицерина 10,0 мл

Воды очищенной 1000 мл

pH после стерилизации 7,2 +/- 0,2

Все компоненты, кроме глицерина, растворяют в воде. Нагревают при

перемешивании и кипятят 1 мин. Добавляют глицерин и стерилизуют.

Отечественная среда для идентификации синегнойной палочки - среда N 9 для

контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

- Агар Берда-Паркера (Baird-Parker Agar)

Панкреатического гидролизата казеина 10,0 г

Мясного экстракта 5,0 г

Дрожжевого экстракта 1,0 г

Лития хлорида 5,0 г

Агара 20,0 г

Глицина 12,0 г

Натрия пирувата 10,0 г

Воды очищенной 950 мл

pH после стерилизации 6,8 +/- 0,2

После стерилизации охлаждают до 45-50 град. C и добавляют 10 мл

стерильного 1% раствора калия теллурита и 50 мл коммерческой желточной

эмульсии.

- Агар Фогеля-Джонсона (Vogel-Johnson Agar Medium)

Панкреатического гидролизата казеина 10,0 г

Дрожжевого экстракта 5,0 г

Маннита 10,0 г

Калия фосфата двузамещенного 5,0 г

Лития хлорида 5,0 г

Глицина 10,0 г

Агара 16,0 г

Фенолового красного 0,025 г

Воды очищенной 1000 мл

pH после стерилизации 7,2 +/- 0,2

После стерилизации охлаждают до 45-50 град. C и добавляют 20 мл 1%

стерильного раствора калия теллурита.

Отечественная среда для выделения золотистого стафилококка - среда N 10

для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

- Лактозный бульон (Lactose Monohydrate Broth)

Мясного экстракта 3,0 г

Панкреатического гидролизата желатина 5,0 г

Лактозы моногидрата 5,0 г

Воды очищенной 1000 мл

pH после стерилизации 6,9 +/- 0,2

После стерилизации следует быстро охладить среду.

Отечественная среда для предварительного обогащения энтеробактерий -

среда N 11 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных

производителей.

- Тетратионатный желчный бульон с бриллиантовым зеленым (Tetra-thionate

Bile Brilliant Green Broth)

Пептона 8,6 г

Бычьей желчи сухой 8,0 г

Натрия хлорида 6,4 г

Кальция карбоната 20,0 г

Калия тетратионата 20,0 г

Бриллиантового зеленого 0,07 г

Воды очищенной 1000 мл

рН 7,0 +/- 0,2

Нагревают до кипения. Нельзя перегревать. Перед употреблением к 1000 мл

среды добавляют 20 мл раствора йода с калия йодидом (6 г йода

металлического, 5 г калия йодида, 20 мл воды очищенной).

Отечественная среда для выделения сальмонелл - среда N 12 для контроля

микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

- Трехсахарный агар с солями железа (Triple Sugar-Iron -Agar)

Мясного экстракта 3,0 г

Дрожжевого экстракта 3,0 г

Пептона (казеинового и мясного) 20,0 г

Натрия хлорида 5,0 г

Лактозы моногидрата 10,0 г

Сахарозы 10,0 г

Глюкозы моногидрата 1,0 г

Железо-аммоний цитрата 0,3 г

Натрия тиосульфата 0,3 г

Фенолового красного 0,025 г

Агара 12,0 г

Воды очищенной 1000 мл

pH после стерилизации 7,4 +/- 0,2

Среду разливают в пробирки, наполняя их на 1/3 объема. После стерилизации

среду скашивают таким образом, чтобы образовались столбик и косяк.

Отечественная среда для идентификации сальмонелл - среда N 13 для

контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

- Цитратный агар Симмонса

Натрия хлорида 5,0 г

Магния сульфата 0,2 г

Аммония дигидрофосфата 1,0 г

Калия гидрофосфата 1,0 г

Натрия цитрата 3,0 г

Бромтимолового синего 0,08 г

Агара 20 г

Воды очищенной 1000 мл

pH после стерилизации 7,2 +/- 0,2

Отечественная среда для идентификации E.coli - среда N 14 для контроля

микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Примечание. Входящие в состав питательных сред индикаторы и красители добавляют в виде растворов определенной концентрации.

6.2. Ростовые и селективные свойства питательных сред

Основными биологическими критериями качества питательных сред являются их ростовые и селективные свойства, определяемые с помощью микроорганизмов и стандартных питательных сред. В качестве стандартных используют среды, готовые к употреблению, с сертификатом производителя, а также аттестованные в лаборатории среды высокого качества.

Ростовые свойства - это способность питательной среды обеспечивать эффективный и типичный рост соответствующих микроорганизмов.

Селективные свойства - это способность питательной среды частично или полностью подавлять рост сопутствующих микроорганизмов (ассоциантов) при обеспечении роста тест-штаммов.

Тест-микроорганизмы, штаммы-ассоцианты и условия инкубации для определения ростовых и селективных свойств питательных сред представлены в табл. 32.7.

Приготовление рабочей взвеси микроорганизмов

Культуры бактерий и C.albicans смывают с поверхности скошенного агара

стерильным 0,9% раствором натрия хлорида. Готовят стандартные взвеси

каждого тест-штамма, соответствующие 10 Единицам по стандартному образцу

мутности ОСО 42-28-85. Для культур Bacillus subtilis, Bacillus cereus и

Candida albicans - это концентрация 10 КОЕ/мл, для Escherichia coli,

Salmonella abony, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus - 10

КОЕ/мл. Стандартные взвеси методом последующих десятикратных разведений

2 3

доводят стерильным 0,9% раствором натрия хлорида до концентрации 10 и 10

КОЕ/мл. Для определения фактической концентрации рабочих взвесей бактерий и

C.albicans, высевают поверхностным методом из концентрации 10 КОЕ/мл по

0,1 мл на чашку с соответствующей агаризованной средой.

Для смыва конидий A.niger с агара Сабуро используют стерильный 0,9% раствор натрия хлорида, содержащий 0,05% твина-80. Количество конидий в 1 мл взвеси определяют с помощью камеры Горяева или посевом подходящего разведения на агар Сабуро.

Для посева готовят рабочую взвесь A.niger с концентрацией конидий

0,5 x 10 в 1 мл, которую высевают поверхностным методом по 0,1 мл на

чашки с агаром Сабуро.

Приготовленные рабочие взвеси монокультур используют для определения ростовых и селективных свойств питательных сред. Для определения селективных свойств дополнительно готовят посевную дозу, состоящую из равных количеств рабочих взвесей тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта, при этом количество КОЕ штамма-ассоцианта должно быть на 2 порядка выше.

Определение ростовых свойств агаризованных сред

Испытуемую и стандартную агаризованные среды разливают в чашки Петри

диаметром 90 мм по 15 мл, подсушивая агар после застывания. По 0,1 мл

рабочей взвеси тест-микроорганизма с концентрацией 10 КОЕ/мл засевают

поверхностным методом на чашки с испытуемой и стандартной средами в тройной

повторности.

На агаризованных средах после инкубации описывают морфологические особенности колоний, подсчитывают колонии тест-микроорганизмов и определяют коэффициент прорастания по формуле:

К = ----,

где:

N - среднее арифметическое число колоний на чашке с испытуемой средой;

N - среднее арифметическое число колоний на чашке со стандартной

o средой.

Испытуемая агаризованная среда считается годной к употреблению, если коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной питательной средой.

Определение ростовых свойств жидких сред

Жидкие испытуемые и стандартные питательные среды разливают в

стерильные пробирки размером 15x150 мм по 10 мл. По 1,0 мл рабочей взвеси

тест-микроорганизма с концентрацией 10 КОЕ/мл засевают в 3 пробирки с

каждой средой. Рост микроорганизмов определяют визуально по помутнению

и/или изменению цвета среды после периода инкубации. Из пробирок, в которых

наблюдается рост, после предварительного разведения до 10 КОЕ/мл делают

пересев по 0,1 мл на соответствующую стандартную агаризованную среду. После

инкубации описывают морфологические особенности колоний, подсчитывают

колонии тест-микроорганизмов и определяют коэффициент прорастания по

указанной выше формуле.

Испытуемая жидкая среда считается годной к употреблению, если коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной жидкой питательной средой.

Определение селективных свойств

Для оценки селективных свойств питательных сред испытуемую и стандартную среды заражают взвесью тест-микроорганизмов (монокультура) и параллельно смесью тест-штамма и штамма-ассоцианта в определенной пропорции. В случае нескольких штаммов-ассоциантов каждый из них смешивают с тест-микроорганизмом отдельно.

Посев на агаризованные среды осуществляют поверхностным методом. В 3

чашки с каждой средой (испытуемой и стандартной) вносят по 0,1 мл рабочей

взвеси монокультуры, содержащей около 10 КОЕ/мл. Параллельно в 3 чашки с

каждой средой вносят по 0,1 мл посевной дозы, содержащей взвеси

тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта. На всех засеянных чашках после

оптимального срока инкубации при соответствующей температуре отмечают рост

характерных колоний тест-микроорганизма при отсутствии или угнетении роста

штамма-ассоцианта.

Для посева на жидкие питательные среды (стандартную и испытуемую) аналогично используют монокультуру тест-микроорганизма и посевную дозу тест-микроорганизма со штаммом-ассоциантом. В 3 пробирки каждой среды вносят по 1 мл рабочей взвеси монокультуры тест-микроорганизма. Параллельно в 3 пробирки вносят по 1 мл посевной дозы тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта.

Для качественной оценки селективных свойств среды через 24 ч инкубации делают пересев из каждой пробирки, в которой наблюдают рост, бактериологической петлей на чашки с соответствующей агаризованной средой. После инкубации на чашках должен наблюдаться рост характерных колоний тест-микроорганизма при отсутствии или угнетении роста штамма-ассоцианта.

Для характеристики питательных сред учитывают коэффициент прорастания и селективные свойства, а также морфологию выросших колоний.

Таблица 32.7

Тест-микроорганизмы и условия инкубации для

определения ростовых и селективных свойств

питательных сред

┌────────────────────────┬──────────────┬──────────────────────────────────┬───────────────────────┐

│ Питательные среды │ Назначение │ Тест-микроорганизмы │ Время и температура │

│ │ │ │ инкубации │

├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │

│- Соево-казеиновый агар │Аэробные │Bacillus subtilis ATCC 6633 или │72 ч │

│- Среда N 1 для │бактерии │Bacillus cereus ATCC 10702; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│выращивания бактерий │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│- Сабуро агар с глюкозой│Дрожжи, │Candida albicahs NCTC 885-653 или │5 сут. │

│и антибиотиками │плесени │Candida albicans ATCC 10231; │(22,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 2 для │ │Aspergillus niger ATCC 9642 │ │

│выращивания грибов │ │ │ │

│ │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

│- Бульон Мосселя │Обогащение │Escherichia coli ATCC 25922; │24-48 ч │

│- Мак-Конки бульон │энтеробактерий│Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 3 для │ │ │ │

│обогащения │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│энтеробактерий │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

│- Мак-Конки агар │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24-48 ч │

│- Мосселя агар │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 4 для │ │ │ │

│выделения энтеробактерий│ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

│- Дезоксихолат-цитратный│Сальмонеллы │Salmonella abony IHE 103/39 │24-48 ч │

│агар │ │ │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Ксилоза-лизин- │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│дезоксихолат агар │ │Escherichia coli ATCC 25922 │ │

│- Агар с бриллиантовым │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│зеленым │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │

│- Висмут-сульфитный агар│ │ │ │

│- Среда N 5 для │ │ │ │

│идентификации сальмонелл│ │ │ │

│- Бульон с глюкозой │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│- Среда N 6 для │ │Salmonella abony IHE 103/39; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│идентификации │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │

│энтеробактерий │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │

│- Нитратный бульон │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│- Среда N 7 для │ │Salmonella abony IHE 103/39; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│идентификации │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │

│энтеробактерий │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │

│- Соево-казеиновый │Аэробные │Bacillus cereus ATCC 10702 или │24 ч │

│бульон │бактерии │Bacillus subtilis ATCC 6633; │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 8 для │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │

│выращивания бактерий │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P;│ │

│ │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │

│ │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │

│- Лактозный бульон │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │

│- Среда N 11 для │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│предварительной │ │ │ │

│инкубации энтеробактерий│ │ │ │

│- Агар для выявления │Синегнойная │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │24-48 ч │

│пиоцианина P.aeruginosa │палочка │(P.aeruginosa ГИСК 453); │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 9 для │ │Escherichia coli ATCC 25922 │ │

│идентификации │ │ │ │

│P.aeruginosa │ │ │ │

│- Цетримидный агар │Синегнойная │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │24-48 ч │

│- ЦПХ-агар │палочка │(P.aeruginosa ГИСК 453) │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│для выделения │ │ │ │

│P.aeruginosa │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │

│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │

│- Фогель-Джонсона агар │Золотистый │Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р;│48 ч │

│- Среда N 10 для │стафилококк │Staphylococcus epidermidis АТСС │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│выделения S.aureus │ │14990 │ │

│- Берда-Паркера агар │ │ │ │

│ │ │Штаммы-ассоцианты: │ │

│ │ │Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 │ │

│ │ │(P.aeruginosa ГИСК 453); │ │

│ │ │Escherichia coli АТСС 25922 │ │

│- Селенитовый бульон │Сальмонеллы │Escherichia coli АТСС 25922; │18-24 ч │

│- Тетратионатный бульон │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │

│- Среда N 12 для │ │ │ │

│выделения сальмонелл │ │ │ │

<16 17 181920 21 22 >

Дата добавления: 2016-07-09; просмотров: 388;