Возбудители системных, или глубо­ких, микозов

18.4.1. Возбудители гистоплазмоза {Histoplasma capsulatum, H. duboisii)

Гистоплазмоз — природно-очаговый глубо­кий микоз, характеризующийся преимущес­твенным поражением дыхательных путей.

Различают американский гистоплазмоз (Н. capsulatum) и африканский (Н. duboisii) гистоплазмоз, который регистрируется только на Африканском континенте. Для последне­го характерны поражения кожи, подкожной клетчатки и костей у сельских жителей, а так­же у лиц, контактирующих с почвой и пылью. Кроме человека, в природных условиях этим микозом болеют обезьяны бабуины.

Морфология.Диморфные грибы; мицели-альная фаза представлена септированным ми­целием толщиной 1—5 мкм, микроконидиями сферической или грушевидной формы диа­метром 1—6 мкм, бугристыми макроконидия­ми диаметром 10—25 мкм. При 35—37 °С растут в виде дрожжевых клеток, размеры которых составляют у Я. capsulatum — 1,5/2x3/3,5 мкм, а у Я. duboisii — 15-20 мкм.

Культуралыгые свойства.Колонии дрожже-подобные, блестящие, мягкой консистенции. Оптимальная температура роста 25—30 "С, рН 5,5—6,5, но возможен рост в широких интер­валах рН 5—10.

Антигеннаяструктура. Н. capsulatum имеет общие антигены с Blastomyces dermatitidis. При росте на жидкой среде в течение 3 суток ми-целиальная форма продуцирует экзоантигены h, m которые можно определять с помощью иммунодиффузии в геле.

Факторы патогенности.Микроконидии.

Устойчивость.Микроконидии обладают высокой устойчивостью во внешней среде, сохраняя жизнеспособность в сухой почве около 4 лет, в воде при 4 °С — около 600 дней. Чувствительны к амфотерицину В и кетоко-назолу, а также к действию обычно применяе­мых антисептиков и дезинфектантов.

Эпидемиология.Гистоплазмоз — сапроноз; естественной средой обитания является почва. Гриб хорошо вегетирует в почве, загрязненной

пометом птиц и летучих мышей, где он растет в виде мицелия. Экология Н. duboisii изучена недостаточно, сообщения о выделении этого вида из почвы носят единичный характер.

Источником возбудителя инфекции для че­ловека и животных служит почва эндемич­ных зон. Эндемические зоны выявлены в Северной, Центральной и Южной Америке, странах Карибского бассейна, Южной Африке, Индии, Юго-Восточной Азии, Новой Зеландии и Австралии. Больные люди и животные не заразны для окружающих. Механизм переда­чи — аэрогенный, путь — воздушно-пылевой. Восприимчивость населения — всеобщая.

Патогенез и клиника.Заражение происходит микро­конидиями, которые трансформируются в организме в дрожжевые клетки. Инкубационный период — око­ло 10 дней. Клинические проявления болезни зависят от иммунного статуса организма: острые формы на­блюдаются у детей в силу особенностей их иммунной системы, хронические диссеминированные формы, как правило, развиваются на фоне недостаточности клеточного звена иммунитета.

Иммунитет.Клеточный, но его напряжен­ность и длительность не изучены.

Микробиологическая диагностика.Материа­лом для исследования служат гной из язвен­ных поражений кожи и слизистых оболочек, мокрота, кровь, моча, ликвор, пунктаты кос­тного мозга, селезенки, печени, лимфатичес­ких узлов и подкожной клетчатки.

Используют микроскопический, микологи­ческий, биологический, серологический, аллер-гологический и гистологический методы диа­гностики. Работа с возбудителем проводится в лабораториях особо опасных инфекций.

Микроскопическое исследование гноя и экс­судата позволяет выявлять гистоплазмы в гиперплазированных клетках системы мо-нонуклеарных фагоцитов в виде овальных дрожжеподобных клеток размером 10—15 мкм, располагающихся внеклеточно или внутри моноцитов и макрофагов. Мазки окрашивают по Романовскому—Гимзе.

Для выделения чистой культуры исследуе­мый материал сеют на среду Сабуро, сыворо­точный или кровяной агар, а также заражают куриные эмбрионы.

Для стимуляции роста в среды добавляют тиамин, для подавления роста бактерий — пе-

нициллин и стрептомицин. Часть посевов выращивают при 22—30 °С, а другую — при 37 °С в течение 3 недель. Затем выделенную культуру идентифицируют по морфологичес­ким признакам и результатам биопробы на мышах. Выявление двухфазного гриба с ха­рактерной морфологией мицелиальной фазы (тонкий септированный мицелий, микроко­нидии и бугристые макроконидии) и дрож­жевых колоний, состоящих из мелких клеток, позволяет идентифицировать Н. capsulatum. Выделение лишь мицелиальной формы гри­ба требует доказательства его диморфизма. Трансформация достигается либо выращива­нием мицелиальных элементов при 30—35 °С, либо внутрибрюшинным заражением мышей, которые на 2—6-й неделе погибают, и во внут­ренних органах выявляют мелкие дрожжи.

Выделить чистую культуру можно путем внутрибрюшинного заражения белых мышей или золотистых хомячков. Через месяц жи­вотных забивают, измельченную печень и се­лезенку засевают в среду Сабуро с глюкозой и выращивают 4 недели в термостате при 25, 30 и 37 "С, после чего посевы исследуют на наличие гистоплазм.

Выделение культуры при первичном гис-топлазмозе затруднено из-за минимальных изменений в легких, поэтому в таких случаях следует ориентироваться на результаты се­рологических реакций, из которых наиболее эффективны РП и РСК с гистоплазмином. РП, иммунодиффузия и латекс-агглютинация становятся положительны на 2—5-й неделе после заражения. Позднее выявляется поло­жительная РСК, титры которой повышаются при генерализации инфекции.

Положительная внутрикожная проба с гис­топлазмином (1:100) появляется на ранней стадии заболевания и сохраняется в течение многих лет. Диагностическое значение имеет лишь переход ранее отрицательной реакции в положительную. Гистоплазминовая внут­рикожная проба может стимулировать ан-тителогенез, поэтому ее надо ставить после серологических исследований.

Для гистологического исследования препара­ты-срезы окрашивают реактивом Шиффа, но наиболее четкие результаты дает метод Гомори— Грокотта: дрожжевые клетки окрашиваются

в черный или коричневый цвет. Возбудитель можно обнаружить в цитоплазме лимфоцитов, гистиоцитов в виде небольших округлых оди­ночных или почкующихся клеток.