Включающие и просветляющие жидкости, применяемые при микроскопическом исследовании

Характер среды, в которую помещают объект, имеет в микроскопической технике очень большое значение; важную роль играет просветление препаратов. Оно имеет целью сделать более явственным исследуемый объект, что достигается путем устранения ряда клеточных включений, мешающих наблюдению. Различные просветляющие жидкости могут оказывать химическое воздействие, приводящее к разрушению, растворению, обесцвечиванию всего «лишнего» в исследуемом объекте. В качестве включающих жидкостей применяются химически инертные, но оптически активные вещества, которые в результате создания определенных условий для прохождения света через препарат способствуют хорошей видимости деталей объекта. Объект бывает виден тем яснее, чем больше он отличается по преломляемости света от жидкости, в которую включен. Структура тонких прозрачных клеток в воде видна лучше, чем в глицерине. Если материал мало прозрачен, то необходимо использовать жидкость с большим показателем преломления; такой объект будет более прозрачен в глицерине, чем в воде.

Вода как индифферентная жидкость часто используется для включения препаратов, так как в воде не меняются форма, размеры клеток, структура и окраска тканей. Крахмальные зерна хорошо видны, алейроновые зерна распадаются, жирное масло сливается в крупные капли, слизь растворяется. Ткани остаются темными и неясно различимы.

Глицерин используется разведенным водой (1:1). Неразведенный глицерин отнимает от растительных тканей воду, сморщивает и деформирует их. Только для растворимых в воде включений (например, слизь) пользуются неразведенным глицерином или смешивают его со спиртом в равных частях. Глицерин относится к индифферентным жидкостям, но перед водой он имеет то преимущество, что ткани в нем долго не высыхают. Кроме того, глицерин обладает слабыми просветляющими свойствами: при продолжительном воздействии глицерина ткани становятся более прозрачными.

Хлоралгидрат применяют в виде раствора (20 частей хлоралгидрата растворяют при нагревании в 5 частях воды и прибавляют 5 частей глицерина, чтобы хлоралгидрат не выкристаллизовывался). Раствор хлоралгидрата является одним из лучших просветляющих средств. Он отличается способностью быстро проникать в ткани, при этом воздух вытесняется, крахмальные зерна разбухают и расплываются; жирные и эфирные масла сначала сливаются в более крупные капли, затем постепенно растворяются; белковые вещества, хлорофилл и другие включения разрушаются; темно окрашенные ткани светлеют; кристаллы остаются без изменения. Препарат, помещенный в раствор хлоралгидрата, обычно подогревают, иногда дают слегка вскипеть – это усиливает и ускоряет просветляющее действие реактива. Большим недостатком хлоралгидрата является его деформирующее действие на ткани вследствие сильного разбухания оболочек.

Вещества щелочного характера применяются в виде водных растворов. Концентрация и продолжительность действия определяются свойствами объекта. Обычно используют 2-5% раствор, редко 10-15%. Раствор натрия гидроксида является сильным просветляющим средством. Крахмальные зерна разбухают и превращаются в клейстер; при продолжительном действии раствора натрия гидроксида или при нагревании препарата в этом реактиве жиры омыляются, растворяются белковые вещества, просветляются темно окрашенные ткани. В щелочной среде оболочки клеток сильно набухают и легко разрываются при надавливании. Вследствие сильного разбухания клеток теряется представление об их истинных размерах; впрочем, это не всегда бывает важно. Из веществ щелочного характера используют натрия гидроксид, калия гидроксид, реже аммиака раствор; последний имеет то преимущество, что не вызывает сильного разбухания оболочек клетки.