Оборудование, используемое при микроскопическом анализе. Оптические приборы и вспомогательные инструменты, применяемые в фармакогнозии.

Цель, задачи и техника макроскопического анализа ЛРС

Макроскопический анализ- вид фармакогности-ческого анализа, основанный на определении морфологических признаков сырья. Макроскопический анализ ЛРС проводится в соответствии с 2.8.23 ГФ РБ II, т.1.

Цель макроскопического анализа – установление подлинности и определение доброкачественности ЛРС (по показателю «Внешние признаки»).

В ходе макроскопического анализа необходимо:

а) определить форму (сравнительно с простейшей геометрической);

б) охарактеризовать цвет;

в) установить наличие и характер запаха;

г) определить вкус (неядовитого ЛРС);

е) определить размеры ЛРС (длину, ширину, диаметр).

Техника макроскопического анализа сводится к изучению внешнего вида ЛРС невооруженным глазом или с помощью лупы (×10), измерению отдельных его частей, проведению органолептических проб, руководствуясь разделом «Внешние признаки» соответствующей НД.

Первую аналитическую пробу ЛРС, предназначенную для определения подлинности, измельченности и содержания примесей, раскладывают на специальную доску, матовое стекло или клеенку и внимательно рассматривают невооруженным глазом или с помощью лупы, обращая внимание на морфологические признаки сырья.

Размеры ЛРС определяют с помощью миллиметровой линейки или раскладывая сырье на миллиметровой бумаге. Для объективного суждения о размерах частей сырья для ЛРС размером более 3 см проводят 10-15 измерений, для ЛРС размером менее 3 см – 20-30 измерений.

Цвет ЛРС определяют при дневном освещении. При этом отмечают цвет с поверхности, а также в изломе или на разрезе.

Запах ЛРС определяют при растирании или изломе, для твердых объектов делают соскоб скальпелем или растирают сырье в ступке. Методика определения запаха описана в 2.3.4 ГФ РБ II, т.1 (Приложение 2).

Вкус ЛРС определяют на последнем этапе анализа, когда выяснено, что анализируемое сырье не ядовито. Для этого, взяв в рот небольшие кусочки сырья, осторожно жуют их, не проглатывая, и, определив вкус, выплевывают и ополаскивают полость рта водой. Для ядовитых образцов вкус не определяют!

II. Микроскопический анализ цельного ЛРС

Микроскопический анализ ЛРС является одним из методов установления его подлинности.

Оборудование, используемое при микроскопическом анализе. Оптические приборы и вспомогательные инструменты, применяемые в фармакогнозии.

Для проведения макро- и микроскопического анализа лекарственного растительного сырья требуется ряд оптических приборов и вспомогательных инструментов: микроскоп, стереомикроскоп, лупа, осветители, объективные и окулярные микрометры, фотонасадка и др.

Микроскопы

Микроскопы позволяют получать увеличенное изображение мелких объектов и необходимы для изучения анатомического строения растений. Наиболее широкое применение находят визуальные микроскопы, в которых изображение рассматривается непосредственно в микроскоп. Микроскоп состоит из трех основных частей: оптических приборов, осветительной системы и штатива (Рис. 1).

К оптическим приборам микроскопа относятся объективы и окуляры, которые участвуют в построении изображения и обеспечивают необходимое увеличение предмета; разрешающая способность микроскопа зависит исключительно от объектива; окуляр служит для дальнейшего увеличения полученного изображения.

Рис. 1. Микроскоп для морфологических исследований МИКМЕД-1 с бинокулярной насадкой и зеркалом в качестве осветителя: 1 – окуляры, 2 – бинокулярная насадка, 3 – револьверное устройство, 4 – объектив, 5 – предметный столик, 6 – конденсор, 7 – зеркало, 8 – рукоятка перемещения кронштейна конденсора, 9 – рукоятка тонкой фокусировки, 10 – рукоятка грубой фокусировки, 11 – тубусодержатель, 12 – винт для крепления насадки.

Объектив представляет собой систему оптических стекол, вставленных в металлическую оправу. Существует несколько категорий объективов. В биологической практике наиболее часто используют объективы-ахроматы, которые представляют собой системы, исправленные в отношении хроматической и сферической аберрации и дающие плоское изображение. Они пригодны для большинства работ как с окрашенными, так и с неокрашенными объектами, а также в микрофотографии. Объектив дает действительное, увеличенное, обратное изображение предмета. Для обозначения объективов введено стандартное обозначение, состоящее из цифр и букв, которые выгравированы на оправе объектива; первая цифра обозначает собственное увеличение объектива, вторая — нумерическую апертуру (апертура - характеристика оптического прибора, описывающая его способность собирать свет и противостоять дифракционному размытию деталей изображения); если на объективе указана еще третья цифра, то она обозначает толщину покровного стекла, на которую рассчитан объектив. Обычно объективы рассчитаны на покровное стекло толщиной 0,17 мм. Буквы обозначают тип оптической коррекции (ПЛАН — объективы-ахроматы с плоским полем (представляют собой сложные линзы, состоящие из рассеивающей и собирающей линз, чаще всего склеенных между собой оптическим клеем), АПО — объективы-апохроматы (подтип ахроматов)).

Окуляр состоит из двух плоско-выпуклых линз, вставленных в металлическую оправу цилиндрической формы. Назначение окуляра – в дальнейшем увеличении того действительного изображения, которое получено от объектива; при этом получается прямое, увеличенное и мнимое воспроизведение того изображения, которое дает объектив. Поэтому в итоге изображение, получаемое в микроскопе, является обратным, мнимым и увеличенным.

Осветительная система микроскопа состоит из зеркала, диафрагмы и конденсора. Зеркало микроскопа имеет две поверхности – плоскую и вогнутую. Диафрагма пропускает определенный конус лучей, соответствующий апертуре объектива.Существуют пластинчатые, цилиндрические и ирисовые диафрагмы; наиболее распространены последние. Конденсор состоит из двух или трех линз. Назначение конденсора – обеспечить освещение объектива широко расходящимся пучком лучей, что дает возможность более полно использовать численную (нумерическую) апертуру оптически сильных систем.

Штатив служит основой для оптической и осветительной части микроскопа. Основные части штатива: основание (или башмак), тубусодержатель, тубус, снабженный револьвером, механизмы грубого и микрометрического движения тубуса, предметный столик.

Тубус служит для размещения объективов и окуляра. Револьвер имеет три или четыре гнезда для ввинчивания объективов, что позволяет при исследовании быстро переходить от одного увеличения к другому. Объективы центрированы с револьвером так, что при последовательном переходе от более слабого к более сильному объективу точка, находящаяся в центре поля зрения более слабого объектива, не должна выходить за пределы поля зрения. Механизмы передвижения тубуса служат для наведения на фокус. Грубая фокусировка осуществляется с помощью кремальеры. Более тонкая фокусировка достигается микрометрической установкой. Головка (барабан) микрометрической установки в некоторых микроскопах имеет шкалу, которая показывает высоту поднятия или глубину опускания тубуса, поэтому может быть использована для измерения толщины исследуемого объекта. Наиболее распространены монокулярные тубусы, выпускаются также бинокулярные тубусы, применение которых дает возможность производить наблюдение препарата двумя глазами и избежать преждевременного утомления глаз.

Предметный столикслужит для размещения исследуемого объекта. Имеются столики неподвижные и вращающиеся, последние облегчают плавное передвижение объекта в горизонтальной плоскости. На предметный столик микроскопа может быть установлен специальный прибор для передвижения исследуемого объекта — препаратоводитель.

Правила пользования микроскопом:

♦ Микроскоп необходимо тщательно оберегать от пыли.

♦ Перед началом работы микроскоп помещают на рабочее место, для этого его берут за изогнутую часть штатива, держа в вертикальном положении, и осторожно ставят на рабочее место.

♦ Затем налаживают освещение препарата, используя вогнутое зеркало. Плоское зеркало используют при работе с объективами, требующими применения конденсора.

♦ Искать источник света надо с объективом слабого увеличения или совсем без объектива. Слишком яркого освещения следует избегать, так как оно может ослепить глаз и на некоторое время лишить его чувствительности. Интенсивность освещения можно ослабить с помощью матового стекла, которое накладывается на кольцо под конденсором.

♦ Следует приучить себя смотреть в окуляр микроскопа одним глазом, другой оставлять открытым. В противном случае глаза быстро устают. Удобнее смотреть в микроскоп левым глазом, а тетрадь для рисования помещать с правой стороны.

♦ Исследование препарата начинают со слабого (малого) увеличения. После изучения общего вида препарата переходят к сильному (большому) увеличению. Для этого, поместив в центр поля деталь, которую хотят рассмотреть при сильном увеличении, поворотом револьвера сменяют объектив. Объективы в микроскопе (кроме иммерсионного) подогнаны так, что при переходе от одного к другому не приходится пользоваться механизмом грубой фокусировки.

♦ Изучая препарат при большом увеличении, правую руку следует все время держать на рукоятке микрометрического винта, чтобы фокусировать необходимую часть поля зрения.

♦ Во время работы надо следить за чистотой объективов, не допускать попадания жидкости на линзу объектива. Окончив изучение препарата, необходимо поднять тубус на значительное расстояние, и только после этого снять препарат со столика.

Стереомикроскопы

Основным достоинством стереомикроскопа является то, что он позволяет видеть предметы объемными и дает прямое изображение. Стереомикроскоп позволяет наблюдать предметы как в проходящем свете (прозрачные объекты и срезы), так и в отраженном (непрозрачные объекты и поверхность сухих частей растения). Благодаря большому полю зрения (до 44 мм) и рабочему расстоянию (до 100 мм) стереомикроскопы удобны для препарирования исследуемых объектов. При исследовании ЛРС с помощью стереомикроскопа изучают различные трихомы (волоски, железки) на поверхности листьев и других частей растений, мелкие цветки, плоды, семена и др.

Лупа

Лупу чаще используют при макроскопическом анализе ЛРС, когда надо определить наличие и характер опушенности, наличие железок и т.п., а также при исследовании мелких объектов — семян, цветков, плодов сельдерейных и т.д. Лупа состоит из одной простой или сложной положительной (увеличивающей) линзы. Рассматриваемый предмет должен находиться в передней фокальной плоскости или несколько ближе.

Осветители

При работе с микроскопами препарат может быть освещен естественным светомили искусственным – с помощью осветителя. Наиболее простым является осветитель для проходящего света. Его устанавливают вместо зеркала под конденсором микроскопа. Источником света служит лампа накаливания, питающаяся непосредственно от электросети.

Микрометры

Для измерения различных деталей препарата под микроскопом (кристаллов, крахмальныхзерен, волосков, железок, пыльцы и др.) служит окулярный микрометр, который предварительно должен быть калиброван при помощи объективного микрометра.

Объективный микрометр представляет собой предметное стекло с нанесенной на него шкалой в 1 мм, разделенной на 100 частей. Таким образом, каждое деление такого микрометра равно 10 мкм. Окулярный микрометр представляет собой круглую стеклянную пластинку с делениями. Пластинку вкладывают в окуляр микроскопа. При калибровке деления окулярного микрометра совмещают с делениями объективного микрометра. Калибровка должна проводиться при том увеличении, при котором будут вести измерение.

Измерение анатомических элементов под микроскопом обычно ведется при большом увеличении. Элемент или деталь препарата, которая подлежит измерению, передвигают в центр поля зрения и совмещают со шкалой окулярного микрометра. Определяют, сколько делений шкалы укладывается на длине или ширине измеряемого элемента. Зная цену деления окулярного микрометра, выражают размеры элемента в микрометрах. Существуют и другие типы окулярных микрометров.