Серологические реакции и оценка их результатов

Серологические реакции - это реакции между антигенами и антите­лами in vitro, которые применяют для выявления антигенов или анти­тел по одному известному реагенту. В серологических реакциях можно устанавливать титр антител в сыворотке крови при помощи известного антигена и на основании полученных данных судить об имевшем место контакте между инфекционным агентом и макроорганизмом. С помо­щью известных антител, содержащихся в диагностических иммунных сыворотках, могут быть идентифицированы самые разнообразные ан­тигены, в том числе и микроорганизмы - возбудители заболеваний лю­дей и животных и определен их серовариант. Серологические реакции дают возможность судить о динамике накопления антител в процессе заболевания, напряженности иммунитета, возникающего после профи­лактических прививок.

Для серологической диагностики инфекционных заболеваний ши­рокое распространение получили реакции агглютинации, непрямой гемагглютинации, нейтрализации и связывания комплемента.

Реакция агглютинации (РА) проявляется в склеивании и выпадении в осадок корпускулярных антигенов: бактерий, эритроцитов, а также химических частиц с адсорбированными на них антигенами под влия­нием антител в среде с электролитом. Реакция протекает в две фазы. В первой фазе происходит специфическая адсорбция антител (агглютининов) на поверхности клетки, несущей соответствующие антигены (агглютиногены), во второй - образование агрегата (агглютината) и выпадение его в осадок, причем этот процесс происхо­дит только в присутствии электролита (раствор хлорида натрия).

Реакция агглютинации достаточно специфична и чувствительна, однако по этим признакам она уступает другим серологическим реак­циям. Повысить специфичность и чувствительность РА можно путем разведения исследуемой сыворотки до ее титра или половины титра.[11] РА широко используется для диагностики брюшного тифа, иерсиниоза, бруцеллеза, туляремии.

Реакция пассивной (РПГА) и непрямой гемагглютинации (РНГА). Под непрямой или пассивной агглютинацией понимают реакцию, в которой антитела агглютинирует антиген, предварительно адсорбиро­ванный на различных субстратах. В качестве адсорбентов чаще всего применяют эритроциты различных животных, порошок целлюлозы и бентонита. В некоторых случаях пользуются обратным вариантом, т.е. адсорбируют не антигены, а антитела на эритроцитах или иных части­цах. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют анти­генными эритроцитарными диагностикумами и используют для выяв­ления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные анти­телами, именуют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагно­стикумами и применяют для выявления антигенов. РПГА широко ис­пользуется для диагностики гриппа, аденовирусной инфекции, брюш­ного тифа, паратифов, шигеллезов, сальмонеллеза, вирусных энцефали­тов, вирусного гепатита В и др.

Реакция связывания комплемента (РСК). РСК разработана Ж. Борде и О. Жангу в 1901 г., которые установили, что при образовании комплекса антиген-антитело происходит адсорбция комплемента. Вследствие того, что этот процесс не определяется визуально, для вы­явления адсорбции (связывания) комплемента авторы использовали индикаторную гемолитическую систему - эритроциты барана, сенси­билизированные гемолитической антисывороткой кролика. При внесе­нии сенсибилизированных эритроцитов в пробирку с исследуемой сы­вороткой, антигеном и комплементом гемолиз произойдет только при наличии свободного комплемента (реакция отрицательная). В случае, если комплемент адсорбировался на системе антиген-антитело, гемо­лиза не будет (реакция положительная). РСК является одной из наибо­лее распространенных серологических реакций для определения при­роды и количества антител или антигенов ввиду своей высокой чувст­вительности и специфичности. Она применяется для серологической диагностики бактериальных, риккетсиозных, вирусных и микоплаз­менных инфекционных заболеваний. Ее универсальность состоит в том, что она может быть использована для определения не только мик­робных антигенов, но и других белков микробного происхождения.

Для измерения титра реакции агглютинации определяется конечное разведение сыворотки, при котором отмечается отчетливый положи­тельный результат. В связи с этим при исследованиях сывороток от больных большое значение приобретает вопрос о так называемых ди­агностических титрах, в особенности в тех случаях, когда по разным причинам (скрытая инфекция, ранее перенесенное заболевание) возбу­дитель агглютинируется сыворотками здоровых.

Диагностический титр, свидетельствующий о наличии заболевания, должен значительно (в 2-4 и более раз) превышать наиболее часто встречающиеся величины титров в сыворотках здоровых лиц соответ­ствующих возрастных групп. Он определяется на основании результа­тов наблюдений и не является стабильным, а изменяется в зависимости от изменений эпидемиологической обстановки.

Существенное значение при проведении дифференциального диаг­ноза результатов серологических реакций является нарастание титров антител в динамике. Диагностическое значение имеет нарастание вели­чины титра антител в 4 раза и выше.

Диагностическая ценность серологических исследований повыша­ется при определении классов антител (IgM, IgG) к исследуемым воз­будителям. Антитела класса IgM появляются в остром периоде инфек­ционного заболевания, а антитела класса IgG свидетельствуют о значи­тельной продолжительности процесса. У детей первых месяцев жизни антитела IgG в крови чаще всего являются материнского происхожде­ния.

Табл. 69. Диагностические титры антител при инфекционных забо­леваниях