Молекулярная гибридизация. Полимеразная цепная реакция.

Метод основам на выявлении в биоматериале от больного из внешней среды или препарат из чистых культур после донательноетъю нуклеиновых кислот (МЮ. определение их рода, вила и типа специфичности Применяют два метола:

I. Молекулярная гибридизация (MB) процесс, в котором одноцепочечная ПК исследуемою микроорганизма (мишень) при взаимодействии с комплементарным фрагментом ПК. включающей метку (зонд) образует двухцепочечный комплекс Назначение метода:

выявление степени сходства различных ДНК Применяется для идентификации микроорганизмов, особенно тех, которые трудно и медленно растут (микоплазмы. хламидии. вирусы )

Материал для исследования:

гной; кровь; отделяемое из уретры: моча, испражнении, биопунктаты тканей и органов: объекты окружающей среды (вода, почта). Методы гибридизации:

- в растворе,

- на фильтре,

- на стекле.

Зонд - это двухцепочечные или одноцепочечные фрагменты ДНК меченые затонной, флюорисцентной или ферментной.

II ПЦР (полимеразная цепная реакция) - что способ быстрого получения множественных копий специфической последовательности ДНК бактерий, грибов, вирусов до количество, достаточного для идентификации другими молекулярно-биологическими методами Назначение:

• индикация микроорганизмов в объектах внешней среды, пищевых продуктов, материале от больных,

• идентификация микроорганизмов.

• генетическое типирование,

• выявление генов вирулентности. Материал для исследования тог же Основные компоненты:

• исследуемая проба ДНК;

• смесь ДНТФ (дезоксинуклеотилтрифосфат),

• достраивание с помощью ДНК - полимеразы:

• праймеры - синтетические фрагменты ДНК;

• специфический буфер;

• минеральное масло;

• мембрана.