Иммуноферментный анализ (ИФА)

ИФА, как и другие системы иммуноанализа, основан на специфическом распознавании и взаимодействии антигенов и антител. Процесс образования иммунных комплексов носит равновесный характер и зависит от аффинности компонентов, их концентрации и других условий реакции. Для оценки их количества возможно прямое определение концентрации образующихся иммунокомплексов, либо измерение оставшихся свободными мест специфического связывания. Второй общей стадией любого метода ИФА является формирование связи меченного ферментом соединения со специфическим комплексом или свободными центрами связывания. И наконец, заключительным обязательным процессом в ИФА является трансформация ферментной метки в соответствующий сигнал, измеряемый каким-либо физико-химическим методом (спектрофотометрическим, флуориметрическим и т.д.), что достигается путем измерения скорости превращения субстрата или количества продукта, образующегося за фиксированный промежуток времени.

Основные достоинства ИФА, обеспечившие широкую распространенность метода:

· высокая чувствительность, позволяющая выявлять концентрации антигена до 10 пг/мл;

· высокая стандартность и воспроизводимость;

· возможность использовать минимальные объемы исследуемого материала;

· стабильность при хранении всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА (до года и более);

· простота проведения реакции;

· наличие как инструментального (в качественном и количественном варианте), так и визуального учета;

· возможность автоматизации всех этапов реакции;

· относительно низкая стоимость диагностических наборов и оборудования.

Применение ИФА:

· диагностика инфекционных заболеваний:

· обнаружение антигенов возбудителя;

· обнаружение антител к антигенам возбудителя;

· мониторинг заболевания, определение ответа на терапию, прогноза развития заболевания и его исхода;

· контроль поствакцинального иммунитета;

· диагностика аутоиммунных заболеваний:

· определение аутоантител;

· диагностика аллергических заболеваний:

· определение общего и специфического IgE;

· определение продуктов активированных эозинофилов, базофилов и тучных клеток;

· диагностика злокачественных опухолей:

· определение в сыворотке маркеров опухолевого роста;

· фенотипирование опухолевых клеток (тканей) для уточнения происхождения и дифференцировки опухоли;

· определение концентрации гормонов, параметров менструально-овуляторного цикла;

· диагностика беременности;

· определение концентрации лекарственных препаратов;

· определение допинга;

· определение загрязнения окружающей среды;

· и многое другое.

В зависимости от подхода к измерению результата реакции выделяют неконкурентный и конкурентный ИФА.

Если на первой стадии в системе присутствует только определяемый реагент: антиген или антитела, то метод является неконкурентным.

Если на первой стадии анализа в системе одновременно присутствуют анализируемое соединение и его аналог (меченное ферментом анализируемое соединение или анализируемое соединение, иммобилизованное на твердой фазе), конкурирующие за имеющиеся центры специфического связывания, то метод является конкурентным.

Выделяют также гомогенныйигетерогенныйИФА.