Робота 14 Підрахунок кількості тромбоцитів у крові

Розрізняють прямі і непрямі способи підрахунку тромбоцитів. Останні здійснюють за допомогою визначення кількості кров’яних пластинок у забарвленому мазку. Ця величина співвідноситься з кількістю еритроцитів і в аналізі крові позначається як 1:1000. Після цьго розраховують абсолютну кількість тромбоцитів у 1 л крові. Прямий метод точніший. Дослідження проводять у камері Горяєва відразу після взяття крові. Для стабілізації крові можна користуватися одним із розчинів, а саме: 5-7 % трилону Б, 1% оксалату амонію з метиленовим синім та ін. Методики підрахунку також різні: з використанням фазово-контрастної та люмінесцентної мікроскопії, а також на будь-якому лічильнику типу “Культер” або “Целоскоп”.

Мета роботи - підрахувати й оцінити кількість тромбоцитів у крові досліджуваного.

Для роботи потрібні: мікроскоп, освітлювач, змішувач для червоної крові, камера Горяєва, покривне скло, штатив з пробіркою, чашка Петрі з вологим фільтрувальним папером (волога камера), 1% розчин оксалату амонію, голка, 96% спирт етиловий, 2% розчин йоду спиртовий, вата, гумова груша.

Хід роботи. Принцип підрахунку тромбоцитів подібний до того, що застосовується для визначення кількості еритроцитів. Але тромбоцити швидко руйнуються, якщо їх вилучити з кровоносного русла, тому кров треба брати якомога швидше, а змішувач має бути вологим. Отже, слід частково заповнити змішувач, насмоктавши стабілізаційної рідини з пробірки за допомогою гумової груші. Проколоти шкіру пальця й, зануривши кінець змішувача у краплю крові, набрати її до позначки 0,5. Простежити, щоб у носику змішувача не було повітря, а стабілізаційна рідина не вилилась у краплю крові на пальці. Для цього треба тримати змішувач горизонтально. Набравши кров, занурити кінчик змішувача у пробірку з рідиною і набрати її до позначки 101. Перемішати вміст меланжера та залишити його в горизонтальному положенні на 10 хв, щоб відбувся гемоліз еритроцитів. Підготувати лічильну камеру. Заповнити її розчином з меланжера і покласти в чашку Петрі на 5 хв. Це потрібно для того, щоб тромбоцити осіли на дно. Потім вийняти з вологої камери, покласти під об’єктив мікроскопа і підрахувати тромбоцити у 25 великих квадратах сітки (25 ·16 = =400 малих квадратів).

Рекомендації щодо оформлення результатів роботи. Кількість тромбоцитів у 1 мкл розраховують за такою формулою:

Х = (а · 400 · 200) / 400,

де х – кількість тромбоцитів у 1 мкл;

а – кількість тромбоцитів у 400 малих квадратах;

200 – ступінь розведення крові;

400 – множник, що приводить результат до об’єму 1 мкл (виходячи із об’єму малого квадрата).

Практично кількість тромбоцитів у 400 малих квадратах множать на 2000, а потім ще на 10⁶ і отримують кількість тромбоцитів у 1 л.

У висновках відповісти на таке запитання: