Работа 18. Выделение β-фруктофуранозидазы из дрожжей и ферментативный гидролиз сахарозы

Данный фермент (прежнее название инвертаза или сахараза) разлагает сахарозу на фруктозу и глюкозу (инвертный сахар):

С₁₂Н₂₂О₁₁ + Н₂О = С₆Н₁₂О₆ + С₆Н₁₂О₆

сахароза глюкоза фруктоза

ХОД РАБОТЫ

2-3 г прессованных дрожжей смешивают с 2-3 г кварцевого песка, доливают 5 мл воды и тщательно растирают в фарфоровой ступке. Затем приливают еще 15 мл воды, нагретой до 40°С, и продолжают растирание в течение 10 минут. Раствор профильтровывают через складчатый фильтр. Первые порции мутного фильтрата сливают снова на фильтр. На фильтре будет находиться β-фруктофуранозидаза, расщепляющая сахарозу на глюкозу и фруктозу.

В три пробирки помещают по 5 мл 2%-ного раствора сахарозы. Одну оставляют для контроля, во вторую приливают 1 мл фильтрата, в третью также 1 мл фильтрата, но предварительно прокипяченного. Пробирки ставят в водяную баню с температурой 40°С. Через 15-20 минут в них добавляют 5 мл реактива Фелинга, а затем содержимое следует хорошо прокипятить на горелке. В присутствии восстанавливающих сахароз выпадает кирпично-красный осадок закиси меди (Сu₂О).

На основании результатов реакции делают заключение о
действии фермента β-фруктофуранозидазы и о влиянии на
его активность высокой температуры.

Результаты записывают по схеме:

МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

1) дрожжи прессованные; 2) ступка; 3) кварцевый песок; 4) воронки; 5) штатив с пробирками; 6) водяная баня; 7) 2%-ный раствор сахарозы; 8) реактив Фелинга; 9) пипетки; 10) фильтровальная бумага.