Микробиологическая диагностика холеры

По тяжести клинического течения, по летальности, по способности одновременно охватывать большие территории холера относится к группе ООИ. Диагностические исследования на холеру регламентируются и осуществляются специально подготовленными специалистами лабораторий ООИ центров госсанэпиднадзора ведомственных и противочумных учреждений.

Классификация возбудителя холеры.Сем. Vibrionaceae, род Vibrio, вид V. cholerae О1 (биовары сholerae, eltor; серовары Инаба, Огава и Гикошима) и О139 серогрупп.

Холерные вибрионы – слегка изогнутые палочки (1,5-3,0 х 0,2-0,6 мкм), имеющие полярно расположенный жгутик; характеризуются значительным полиморфизмом; грамотрицательные; спор и капсул не образуют.

Холерные вибрионы – факультативные анаэробы, к питательным средам не требовательны. Щелочелюбивы. Размножаются при температуре 35-37°С и pH равном 8,6-9,0. Элективной средой является 1% пептонная вода с pH 8-9. На поверхности этой среды через 6-8 часов они образуют тонкую нежную, голубоватую “пленку”. На щелочном агаре через 12-14 часов колонии круглые, диаметром 1-2 мм, гладкие, плоские, прозрачные, голубоватые в проходящем свете, гомогенные, с ровным краем.

Вибрионы – хемоорганотрофы. Биохимически активны. Сахаролитические свойства выражаются в расщеплении сахаров с образованием кислоты без газа. Ферментация сахарозы, маннозы и отсутствие ферментации арабинозы является важным диагностическим признаком (1 ряд Хейберга).

Протеолитические свойства: разжижают желатину, образуют индол, не образуют сероводород, восстанавливают нитраты в нитриты, расщепляют крахмал и т.д.

Вибрионы содержат термостабильные О-антигены (соматические) и термолабильные Н-антигены (жгутиковые). По О-антигену они разделяются на серогруппы. V. cholerae, V. eltor принадлежат к О1 серогруппе. О1-антиген состоит из трех компонентов – А, В, С, сочетание которых определяет серовары: Огава (АВ), Инаба (АС), Гикошима (АВС).

Встречаются вибрионы, которые не агглютинируются холерной О1-сывороткой. Это так называемые НАГ-вибрионы. В настоящее время установлено около 200 серологических О-групп НАГ-вибрионов.

Факторы вирулентности и патогенности. У холерных вибрионов 2 типа токсинов – эндотоксин и экзотоксин или энтеротоксин. Эндотоксин – ЛПС клеточной стенки, термостабилен, стимулирует выработку вибриоцидных антител и агглютининов. Основная роль в развитии симптома холеры принадлежит холерогену, который вызывает расстройство функциональных систем, ответственных за транспортировку жидкости и электролитов из внутренней среды в просвет кишечника.

Токсигенные, эпидемически значимые варианты холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, содержащие гены холерного токсина (ctx AB) и токсин-корегулируемых пилей (tcp A), вызывают заболевания холерой, склонные к широкому эпидемическому распространению. Нетоксигенные (не содержащие гена холерного токсина), эпидемически не опасные варианты холерных вибрионов О1 и других серогрупп могут вызывать спорадические или групповые заболевания, не склонные к широкому эпидемическому распространию.

Экология, источники, пути распространения, особенности патогенеза и иммунитета при холере.Холера – антропонозное заболевание. Источником инфекции является больной человек и бактерионоситель. При холере, вызванной V. eltor, отмечается более длительное бактерионосительство и наличие значительного количества атипичных форм болезни.

Заражение происходит алиментарным (через инфицированные воду или продукты) или контактно-бытовым путем.

Вибрионы преодолеют желудочный барьер, достигают тонкой кошки, начинают интенсивно размножаться и выделять экзотоксин. Без предварительной нейтрализации соляной кислоты желудочного содержимого лишь очень большие дозы холерного вибриона (10¹¹) вызывают у отдельных лиц заболевание, а после предварительной нейтрализации соляной кислоты желудка заболевание возникает уже при введении 10⁶ вибрионов (т.е. в 100 000 раз меньшей дозой).

Энтеротоксин активирует аденилатциклазу слизистой оболочки кишечника, что способствует увеличению количества цАМФ и выходу солей и воды в просвет кишечника. Начинается профузный понос. Потеря жидкости достигает одного литра в течение часа. Больные погибают в результате тяжелого обезвоживания, ацидоза, уремии. Заражение холерными вибрионами может вызывать различную клиническую картину – от бессимптомного носительства до состояния алгида.

При холере иммунитет носит антимикробный и антитоксический характер и связан с выработкой специфических антител, усилением фагоцитоза. Большую роль придают факторам местной защиты – секреторным иммуноглобулинам.

Правила забора и доставки материала при диагностике холеры, как особо опасной инфекции.Материал для исследования – испражнения и рвотные массы больных. Для установления факторов передачи и путей распространения инфекции – трупный материал, вода и пищевые продукты. Для выявления носителей – фекалии, желчь.

Учитывая слабую устойчивость холерных вибрионов к кислотам, дезинфицирующим веществам, сбор проб необходимо осуществлять в чистую стерильную стеклянную посуду, которая не должна содержать следов дезинфицирующих веществ. Материал необходимо забирать до приема антибиотиков.

Доставка материала в лабораторию должна быть осуществлена не позднее 2-х часов от момента его сбора или следует помещать пробы в консервант: 1% пептонную воду, щелочную пептонную воду с теллуритом калия.

Важно обеспечить безопасность при транспортировке материала, так как холера относится к числу особо опасных инфекций.