Опыт 3. Определение неорганического фосфора в сыворотке крови по восстановлению фосфорно-молибденовой кислоты.
Фосфор в организме находится в виде неорганических солей и органических соединений (фосфорные эфиры углеводов, фосфопротеины, нуклеиновые кислоты, АМФ, АДФ, АТФ, фосфолипиды и др.). Из неорганических солей в плазме и сыворотке крови содержатся преимущественно однозамещенные и двузамещенные фосфаты. Содержание неорганического фосфора в сыворотке крови взрослого человека в норме 2-4 мг% (0,65-1,3 ммоль/л), у ребенка оно выще (1,29-2,26 ммоль/л). Гипофосфатемия наблюдается при рахите, при гиперфункции паращитовидных желез. Гиперфосфатемия наблюдается при передозировке витамина D, при недостаточной функции паращитовидных желез, при почечной недостаточности.
К 1 мл сыворотки крови прибавляют 4 мл дистиллированной воды, 5 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты, оставляют на 10 минут. Выпадает осадок белков. Сыворотку центрифугируют 10 минут. К 5 мл центрифугата добавляют 1 мл 5% раствора молибдата аммония, 0,2 мл раствора эйконогена и 1,8 мл дистиллированной воды. Смесь оставляют на 20 минут при комнатной температуре, затем измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре против контроля при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр).
Контроль готовят одновременно с опытной пробой. К 2,5 мл трихлоруксусной кислоты приливают 2,5 мл воды, 1 мл раствора молибдата аммония, 0,2 мл раствора эйконогена, 1,8 мл воды. Оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Расчет производят по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика. Из рабочего стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице 6.
Таблица 6. Состав смесей для калибровочного графика.
| № пробирки | Рабочий стандартный раствор, мл | Раствор трихлоруксусной кислоты, мл | Раствор молибдата аммония, мл | Раствор эйконогена, мл | Дистиллированная вода, мл | Содержание фосфора в пробе | |
| мг | мг% | ||||||
| 0,5 | 2,5 | 1,0 | 0,2 | 3,8 | 0,01 | ||
| 1,0 | 2,5 | 1,0 | 0,2 | 3,3 | 0,02 | ||
| 2,0 | 2,5 | 1,0 | 0,2 | 2,3 | 0,04 | ||
| 3,0 | 2,5 | 1,0 | 0,2 | 1,3 | 0,06 | ||
| 4,0 | 2,5 | 1,0 | 0,2 | 0,3 | 0,08 |
После 20-минутного стояния пробы измеряют как опытные против контроля. На основании полученных данных строят калибровочный график, откладывая на оси ординат найденные величины оптической плотности, а на оси абсцисс - соответствующие им количества фосфора.
Контрольные вопросы
1. В чем разница понятий «минеральный обмен» и «водно-солевой обмен»?
2. Перечислите основные неорганические компоненты крови.
3. Укажите причины гиперфосфатемии и гипофосфатемии.
4. В каких случаях может развиваться гипохлоремия и гиперхлоремия?
5. Какие гормоны регулируют водно-солевой обмен в организме?
Дата добавления: 2015-03-19; просмотров: 1052;