Опыт 6. Количественное определение креатинина в моче по цветной реакции Яффе (метод Поппера).

Креатинин, взаимодействуя с хиноидной формой пикриновой кислоты, образует пикрат креатинина, который в щелочной среде превращается в свою таутомерную форму, имеющую оранжево-красный цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации креатинина.

В мерную колбу на 100 мл отмеряют из суточного количества 0,5 мл мочи и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Встряхивают и добавляют 0,2 мл 10% раствора гидроксида натрия. На 10 минут оставляют при комнатной температуре, после чего дистиллированной водой доводят объем до 100 мл. Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) против контроля.

Одновременно ставят контрольную пробу. В мерной колбе на 100 мл смешивают 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 10% раствора гидроксида натрия, доводят водой до метки.

Стандартная проба. В мерную колбу на 100 мл наливают 0,5 мл основного стандартного раствора креатинина и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Встряхивают и прибавляют 0,2 мл 10% раствора гидроксида натрия. Далее пробы обрабатывают так же, как и опыт.

Расчет производят по формуле:

,

где х - количество креатинина в суточной моче, мг; С_ст - количество креатинина в стандартной пробе, мг; D_оп — оптическая плотность опытной пробы; D_ст - оптическая плотность стандартной пробы; V_сут - суточное количество мочи; V - количество мочи, взятой для анализа.

Полученные данные сопоставить с нормальными величинами содержания креатинина в суточной моче. В норме содержание креатинина в моче у мужчин равно 1-2 г/сут (8,8-17,7 ммоль/сут), у женщин - 0,8-1,8 г/сут (7,1-15,9 ммоль/сут).

Контрольные вопросы

1. В каком виде аммиак и аминный азот попадают из периферических тканей в печень для образования мочевины?

2. Дефект какого из ферментов орнитинового цикла может быть причиной увеличения суточной экскреция аргининосукцината?

3. Почему при поражениях печени наблюдается аминоацидурия?

4. Приведите уравнения нейтрализации ацетоуксусной и b-гидроксимасляной кислот аммиаком.