Микробиологические и иммунологические аспекты дисбиотических нарушений биотопов слизистых оболочек респираторного и урогенитального трактов

Как известно, слизистые оболочки, в том числе респираторного и урогени­тального трактов, выполняют барьерную функцию, заключающуюся в предот­вращении фиксации и проникновения чужеродных веществ и микроорганиз­мов во внутреннюю среду организма человека. КР слизистых оболочек опреде­ляется как состоянием нормофлоры, так и иммунологической реактивностью организма.

Соотношение индигенных и условно-патогенных микроорганизмов, форми­рующих биотопы, предопределяет возникновение, тяжесть и длительность тече­ния воспалительных процессов. Вместе с тем, неоспорима роль местного имму­нитета в защите от инфекций, при которых входными воротами и основной локализацией процесса являются слизистые оболочки. В связи с этим целью настоящего исследования явилось сравнительное изучение микроэкологии и показателей гуморального иммунитета биотопов респираторного и урогени­тального трактов в норме и при воспалительных процессах бактериальной этиологии.

С целью изучения микроэкологии и гуморального иммунитета урогени­тального тракта Е.А.Воропаевой и соавт. (2006) на базе МНИИЭМ им. Г.Н.Га­бричевского проведено обследование по микробиологическим и иммунологи­ческим показателям 90 женщин с неспецифическими воспалительными забо­леваниями половых путей и 40 клинически здоровых женщин, составивших группу контроля.

Исследование микрофлоры ротоглотки с определением содержания секре­торных Ig в слюне проведено у 40 детей с хроническими воспалительными заболеваниями дыхательных путей и 20 здоровых детей контрольной группы в возрасте от 3 до 14 лет. Бактериологические исследования биотопов ротоглот­ки и влагалища проводили согласно руководствам (МЗ СССР, 1989; Покров­ский В.И., Поздеев O.K., 1998; Кира Е.Ф., 2001).

Содержание IgM, IgA, IgG, slgA и sc в слюне и вагинальном отделяемом определяли модифицированным методом РИД (реакция иммунодиффузии) по Манчини.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием мето­дов дисперсионного и корреляционного анализов (Лакин Г.Ф., 1990).

При проведении бактериологического исследования микробиоценоза вла­галища больных и здоровых женщин контрольной группы были определены 4 микроэкологических типа влагалищного биотопа: нормоценоз, промежуточ­ный тип, дисбиоз и вагинит.

Генитальные инфекции и факторы противоинфекционной защиты в генезе

воспалительных заболеваний женских половых органов 47

При нормоценозе доминировали лактобациллы, выделявшиеся в 100% слу­чаев в количестве 7,62+0,32 lg КОЕ/г, количество условно-патогенной микро­флоры не превышало 3 lg КОЕ/г (среднее значение 1,43+0,27).

При промежуточном типе микробиоценоза влагалища выявлялись факуль­тативно-анаэробные микроорганизмы — стрептококки (21,3%) и коринебакте-рии (19,7%) в количестве 2,73+0,31 и 1,86+0,24 lg КОЕ/г соответственно и облигатно-анаэробная кокковая флора: пептострептококки (27,6%) и пепто-кокки (12,4%) в количестве 3,28+0,32 и 2,78+0,24 lg КОЕ/г соответственно. Количество лактобацилл снижалось до 5,72+0,24 lg КОЕ/г.

При дисбиозе влагалища наблюдалось резкое снижение количества лактоба­цилл, частота обнаружения которых не превышала 63,7% при интенсивности колонизации 3,26+0,21 lg КОЕ/г. При этом на фоне снижения уровня лактоба­цилл наблюдались следующие варианты микроэкологических нарушений био­топа влагалища:

1) лактобациллы выявлялись в небольшом колчестве — 3,93+0,64 lg КОЕ/г, наблюдалось значительное содержание — до 6,84+0,76 lg КОЕ/г — факультатив­но-аэробных бактерий с высоким патогенным потенциалом: в-гемолитических стрептококков — 14,03%, стафилококков — 32,3%, энтеробактерий — 31,6%;

2) при среднем содержании лактобацилл 3,76+0,24 lg КОЕ/г наблюдалось нарастание количества облигатно-анаэробных грамположительных и грам-отрицательных УПМ: пептострептококков (63,2%), пептококков (36,8%), про-пионибактерий (17,2%), бактероидов (31,6%), клостридий (7,3%) и др. — до 5-7 lg КОЕ/г при среднем значении 7,28+0,42 lg КОЕ/г.

Таким образом, при дисбиозе влагалища наблюдалось доминирование факультативно- или облигатно-анаэробной флоры при резком снижении количества лактобацилл по сравнению с нормоценозом. Вместе с тем, у 29,8% пациенток с дисбиозами выявлялись ассоциации факультативно- и облигатно-анаэробных бактерий, представленные 2—3 видами микроорганизмов.

При бактериальном вагините лактобациллы выявлялись в отдельных случаях (у 21,7% обследованных) в незначительном количестве — 2,58+0,47 lg КОЕ/г. В составе микробиоценоза доминировали монокультуры условно-патогенных факультативно- и облигатно-анаэробных микроорганизмов в количестве от 6 до 8 lg КОЕ/г при средних значениях 6,28+0,43 и 7,96+0,34 lg КОЕ/г соответ­ственно. Основными возбудителями воспалительного процесса являлись грам-отрицательные облигатные неспорообразующие анаэробы (51,5%), Gardnerella vaginalis (36,4%), стафилококки (21,2%), энтеробактерий (39,3%), грибы рода Candida (24,2%), р-гемолитические стрептококки (18,2%).

Таким образом, было выявлено выраженное изменение микробиоценоза влагалища в зависимости от степени тяжести инфекционного процесса, обусловленное снижением уровня протективной микрофлоры влагалища — лактобацилл, увеличением содержания условно-патогенных факультативно- и облигатно-анаэробных микроорганизмов. При определении взаимосвязи кон­центраций секреторных IgA, slgA, IgG, IgM и sc в вагинальных смывах и коли­чественного содержания условно-патогенной вагинальной микрофлоры были выявлены следующие закономерности.

При нормоценозе в вагинальных смывах не определялись IgA и IgM, а содержа­ние slgA, IgG и sc составляло менее 10 мкг/мл, 6,4+0,2, 7,8+1,2 и 7,2+0,8 мкг/мл соответственно. При промежуточном типе микробиоценоза влагалища IgA и IgM выявлялись в количестве менее 10 мкг/мл: 6,8+0,2 и 7,3+0,4 мкг/мл соответствен­но. Возрастало содержание slgA, IgG и sc: 14,3+2,3, 12,3+1,6 и 18,6+3,6 мкг/мл соответственно. У больных с дисбиозом влагалища концентрация IgA составляла

48 Глава I

12,3+2,4 мкг/мл, IgG - 17,4+1,3 мкг/мл, значительно возрастало содержание IgM — 16,4+0,8 мкг/мл, slgA - 26,4±4,2 мкг/мл и sc - 36,4±6,4 мкг/мл. У больных с неспецифическими вагинитами выявлено значительное содержание в вагиналь­ных смывах slgA — 42,4±4,8 мкг/мл и sc — 86,7±7,2 мкг/мл. Возрастало также содержание IgM и IgA - 22,3+3,6 и 28,4±4,2 мкг/мл соответственно. Содержание IgG изменялось незначительно - до 19,3±2,3 мкг/мл.

Корреляционный анализ микробиологических и иммунологических пока­зателей с учетом патологических изменений типа влагалищного микробиоце­ноза представлен в таблице 1.8.

Как показывают представленные данные, при нормоценозе и промежуточ­ном типе микробиоценоза влагалища не наблюдалось достоверной корреля­ционной зависимости между количеством условно-патогенной микрофлоры и показателями гуморального иммунитета (г 0,3). Вместе с тем, у больных с дис-биозами и бактериальными вагинитами наблюдалась выраженная корреляция между содержанием УПМ и уровнями IgM и IgA, а также slgA и sc в секрете влагалища (г>0,5). Коэффициент корреляции содержания условно-патогенной микрофлоры и IgG не превышал 0,23, что свидетельствовало об отсутствии корреляционной зависимости между этими показателями при данной патоло­гии.

При проведении бактериологического исследования микробиоценоза ротоглотки больных с хроническими воспалительными заболеваниями дыха­тельных путей и здоровых детей контрольной группы также были выделены 4 микроэкологических типа биотопа:

1) нормоценоз, характеризующийся отсутствием микроэкологических нару­шений;

2) промежуточный тип, характеризующийся незначительным угнетением нормофлоры и появлением условно-патогенной микрофлоры в количестве до 3-4 lg КОЕ/г;

3) дисбиоз ротоглотки, при котором наблюдалось значительное угнетение нормофлоры, повышение уровня факультативно-анаэробной условно-пато­генной микрофлоры до 4—5 lg КОЕ/г, появление вирулентных вариантов условно-патогенной микрофлоры, характеризующихся выраженными факто­рами патогенности: наличием в-гемолиза, высокой лецитиназной, ДНКазной, протеолитической активностью и др.;

4) выраженный воспалительный процесс, характеризующийся значительным повышением содержания условно-патогенной микрофлоры и количества вирулентных микроорганизмов до 6—8 lg КОЕ/г.

Индигенная микрофлора задней стенки глотки здоровых детей была пред­ставлена а- и у-гемолитическими стрептококками и нейссериями. Частота выделения этих микроорганизмов у здоровых детей составляла 76,9—90,4% при интенсивности колонизации 6,64+0,38; 4,46+0,24 и 5,32+0,27 lg КОЕ/г соот­ветственно. У здоровых детей также выделялись коагулазоотрицательные стафилококии (34,2%) и коринебактерии (22,7%) в количестве 3,28+0,17 и 2,83+0,42 lg КОЕ/г соответственно.

В результате сравнительного микробиологического обследования задней стенки глотки больных и здоровых детей было обнаружено, что у детей с хрони­ческими воспалительными заболеваниями дыхательных путей резко снижена КР этой области. Это проявлялось в расширении спектра и увеличении количе­ственного содержания следующих УПМ: в-гемолитических стрептококков (34,6%), S. aureus (46,4%), клебсиелл (17,5%), энтеробактеров (8,2%), протея (4,3%), кишечной палочки (7,2%), P. aeruginosa (4,2%), дрожжеподобных грибов

Таблица 1.8 Коэффициенты корреляции содержания условно-патогенной микрофлоры и концентраций секреторных lg при различных типах микробиоценоза влагалища

Примечание: К — средняя концентрация иммуноглобулинов в секрете влагалища; С — среднее значение содержания условно-патоген­ной микрофлоры (УПМ) с учетом показателей просветной и пристеночной областей; г — коэффициент корреляции величин К и УПМ. н/о — невозможность определения корреляционной зависимости.

Таблица 1.9 Коэффициенты корреляции содержания условно-патогенной микрофлоры и концентраций секреторных 1д в слюне при различных типах микробиоценоза ротоглотки

Примечание: К — средняя концентрация иммуноглобулинов в слюне; УПМ — среднее значение содержания условно-патогенной микро­флоры; г — коэффициент корреляции между величинами К и УПМ.

50 Глава I

рода Candida (23,4%). Интенсивность колонизации ротоглотки перечисленны­ми микроорганизмами в острый период составляла 6—8 lg КОЕ/г. У 32,6% боль­ных с хроническими воспалительными заболеваниями дыхательных путей выявлялись ассоциации 2—3 видов перечисленных микроорганизмов. Динами­ка изменения содержания секреторных lg в слюне больных в зависимости от содержания условно-патогенной микрофлоры представлена в таблице 1.9.

При нормоценозе в слюне не определялся IgM, содержание IgA и slgA соста­вляло 21,5±1,7 и 23,6+4,8 мкг/мл, algG и sc —48,4±8,2 и 72,3±12,8 мкг/мл соот­ветственно. При промежуточном типе микробиоценоза ротоглотки IgM выяв­лялся в количестве до 10 мкг/мл. Значительно возрастало содержание IgG и sc: 102,3+31,6 и 143,6±33,6 мкг/мл соответственно. Содержание IgA и slgA повы­шалось незначительно, составляя 37,8+6,3 и 38,4±7,3 мкг/мл соответственно. У больных с дисбиотическими нарушениями ротоглоточного биотопа концентра­ция IgM составляла 15,3+3,2 мкг/мл, IgG — 147,3+26,5 мкг/мл, возрастало содержание IgA — 74,3+7,4 мкг/мл, slgA — 84,3+12,3 мкг/мл и sc — 234,5+26,4 мкг/мл. У больных с выраженным воспалительным процессом дыхательных путей было выявлено значительное содержание в слюне sc, среднее значение которого составило 542,7+57,2 мкг/мл. Возрастало содержание IgA — 158,3+24,2 мкг/мл, slgA — 164,8+32,4 мкг/мл и IgG — 236,4+42,3 мкг/мл. Содержание IgM составля­ло 32,4+4,6 мкг/мл.

Корреляционный анализ микробиологических и иммунологических пока­зателей с учетом типа микробиоценоза ротоглотки показал, что при нормоце­нозе и промежуточном типе микробиоценоза наблюдалась незначительная корреляционная зависимость между количеством условно-патогенной микро­флоры и показателями гуморального иммунитета (г<0,5).

Вместе с тем, у больных с дисбиотическими нарушениями и выраженным воспалительным процессом в области дыхательных путей наблюдалась выра­женная корреляция между содержанием УПМ и уровнями IgG и IgA, а также slgA и sc в слюне (г>0,6).

Коэффициент корреляции между содержанием условно-патогенной мик­рофлоры и IgM не превышал 0,6.

Таким образом, нами были выявлены общие закономерности изменения микробиологических показателей и уровней IgA, slgA, sc и IgM для слизистых оболочек ротоглоточного и влагалищного биотопов. Вместе с тем, уровни перечисленных секреторных lg в слюне (за исключением IgM) значительно превышали показатели, полученные для вагинальных смывов. Были выявлены также значительное содержание и увеличение уровня IgG в слюне, соответ­ствующее степени тяжести воспалительного процесса, что, по-видимому, обусловлено хроническим течением инфекционной патологии дыхательных путей у обследованных детей.

Возможно, наличием общих закономерностей изменения микробиологи­ческих показателей и уровней секреторных lg для слизистых оболочек рото­глотки и влагалища можно объяснить повышенную частоту воспалительных заболеваний гениталий при наличии хронического тонзиллита у женщин.

Однако с учетом того, что микробиологические и иммунологические исследования урогенитального тракта проводились у женщин репродуктив­ного возраста, а изучение состояния слизистых оболочек респираторного тракта — у детей, для уточнения связи дисбиотических нарушений слизистых оболочек влагалища и респираторного тракта необходимо провести данные исследования в одной возрастной группе — у женщин репродуктивного воз­раста.

Генитальные инфекции и факторы противоинфекционной защиты в генезе

воспалительных заболеваний женских половых органов 51