Метод окраски жгутиков по Грэю
| Раствор А: | |
| Дубильная кислота [20% (вес/объем) водная] | 2 мл |
| Калийные квасцы [KAI(SO4)2∙12Н2O, насыщенные водные] | 5 мл |
| Хлористая ртуть, насыщенный водный раствор | 2 мл |
| Основной фуксин 3%-ный (вес/объем) в 95%-ном (объем/объем) этаноле | 0,4 мл |
Краситель желательно добавлять к остальным ингредиентам непосредственно перед использованием, конечный раствор отфильтровать.
| Раствор Б: |
| Карболовый фуксин, приготовленный по Цилю |
Методика:
1. Обычные бактерии удобно выращивать на косячках агара с соответствующим содержанием питательных веществ. За 0,5 ч до взятия пробы в пробирку с косячком добавляют водный раствор пептона, в который переходят микроорганизмы, так как жидкая среда является наиболее подходящей в подобных экспериментах. Затем пробу центрифугируют, чтобы освободиться от составных элементов среды, промывают и вновь центрифугируют. Осадок осторожно (чтобы предотвратить потерю жгутиков) ресуспендируют в 10%-ном (объем/объем) водном формалине до получения слегка мутной суспензии.
2. Суспензию петлей наносят на предметное стекло, наклоняют его под углом 45° и подсушивают препарат на воздухе.
3. Фильтруют прямо на мазок раствор А и оставляют его на нем приблизительно на 6 минут. Точное время следует определить экспериментально.
4. Раствор А смывают с предметного стекла дистиллированной водой.
5. На мазок кладут кусочек промокательной бумаги и заливают на 3 минуты раствором Б.
6. Удаляют промокательную бумагу, промывают предметное стекло дистиллированной водой, осторожно подсушивают впитывающим влагу материалом и смотрят в микроскоп.
Жгутики и клетки бактерий окрашиваются в красный цвет. Значительная доля успеха в осуществлении метода зависит от использования абсолютно чистых обезжиренных предметных стекол. Чтобы обеспечить чистоту стекол, их нагревают либо в пламени горелки Бунзена, до тех пор пока пламя по краям стекла не становится желтым (после чего стеклам дают остыть), либо в муфельной печи в течение 20 минут при 400°С (предметные стекла в печи располагают так, чтобы они не соприкасались). После охлаждения стекла используют немедленно или хранят в емкости, не содержащей пыли. Стекла также становятся очень чистыми, если их сначала протереть жидким очистителем, а затем бумажной тканью. Не рекомендуется применять для очистки стекол, на которых красят жгутики, такие очищающие агенты, как хромовая кислота или 50%-ный (объем/объем) спирт.
Дата добавления: 2014-12-06; просмотров: 1115;