Метод окраски жгутиков по Грэю

Раствор А:
Дубильная кислота [20% (вес/объем) водная] 2 мл
Калийные квасцы [KAI(SO4)2∙12Н2O, насыщенные водные] 5 мл
Хлористая ртуть, насыщенный водный раствор 2 мл
Основной фуксин 3%-ный (вес/объем) в 95%-ном (объем/объем) этаноле 0,4 мл

Краситель желательно добавлять к остальным ингредиентам непосредственно перед использованием, конечный раствор отфильтровать.

Раствор Б:
Карболовый фуксин, приготовленный по Цилю

Методика:

1. Обычные бактерии удобно выращивать на косячках агара с соответствующим содержанием питательных веществ. За 0,5 ч до взятия пробы в пробирку с косяч­ком добавляют водный раствор пептона, в который пере­ходят микроорганизмы, так как жидкая среда является наиболее подходящей в подобных экспериментах. Затем пробу центрифугируют, чтобы освободиться от состав­ных элементов среды, промывают и вновь центрифуги­руют. Осадок осторожно (чтобы предотвратить потерю жгутиков) ресуспендируют в 10%-ном (объем/объем) водном формалине до получения слегка мутной суспен­зии.

2. Суспензию петлей наносят на предметное стекло, наклоняют его под углом 45° и подсушивают препарат на воздухе.

3. Фильтруют прямо на мазок раствор А и оставля­ют его на нем приблизительно на 6 минут. Точное время следует определить экспериментально.

4. Раствор А смывают с предметного стекла дистил­лированной водой.

5. На мазок кладут кусочек промокательной бумаги и заливают на 3 минуты раствором Б.

6. Удаляют промокательную бумагу, промывают предметное стекло дистиллированной водой, осторожно подсушивают впитывающим влагу материалом и смот­рят в микроскоп.

Жгутики и клетки бактерий окрашиваются в красный цвет. Значительная доля успеха в осуществлении ме­тода зависит от использования абсолютно чистых обез­жиренных предметных стекол. Чтобы обеспечить чисто­ту стекол, их нагревают либо в пламени горелки Бунзена, до тех пор пока пламя по краям стекла не становит­ся желтым (после чего стеклам дают остыть), либо в муфельной печи в течение 20 минут при 400°С (предмет­ные стекла в печи располагают так, чтобы они не сопри­касались). После охлаждения стекла используют немедленно или хранят в емкости, не содержащей пыли. Стекла также становятся очень чистыми, если их сна­чала протереть жидким очистителем, а затем бумажной тканью. Не рекомендуется применять для очистки стекол, на которых красят жгутики, такие очищающие агенты, как хромовая кислота или 50%-ный (объем/объем) спирт.








Дата добавления: 2014-12-06; просмотров: 1169;


Поиск по сайту:

При помощи поиска вы сможете найти нужную вам информацию.

Поделитесь с друзьями:

Если вам перенёс пользу информационный материал, или помог в учебе – поделитесь этим сайтом с друзьями и знакомыми.
helpiks.org - Хелпикс.Орг - 2014-2024 год. Материал сайта представляется для ознакомительного и учебного использования. | Поддержка
Генерация страницы за: 0.003 сек.