Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками (прямой способ).

· Указанные сыворотки выпускаются станциями переливания крови во флаконах или ампулах по 5 мл, подкрашенные в соответствующий группе крови цвет.

На этикетке должны быть указаны:

· название учреждения, где изготовлена сыворотка;

· групповая принадлежность сыворотки с обязательным указанием агглютининов;

· номер серии;

· титр агглютининов в сыворотке;

· срок годности;

Для проведения реакции пригодны сыворотки с титром агглютининов не ниже 1:32.

Хранятся сыворотки в холодильнике при температуре +2-4ºС. Допускается замораживание сыворотки — ее можно использовать после оттаивания. Перед применением необходимо убедиться, что в сыворотке нет хлопьев и осадка, она сохранила соответствующий группе цвет. Перед постановкой реакции сыворотка должна согреться до комнатной температуры (+15-25ºС) в течение 30-40 мин. Тарелка или пластинка, на которой ставится реакция, также должна иметь комнатную температуру.

Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток

Оснащение:

1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оαβ(I), Аβ(II), Вα(III) двух серий и сыворотка группы АВо(IV) одной серии.

2. Изотонический раствор хлорида натрия.

3. Белые фарфоровые или любые другие пластинки (тарелки) со смачиваемой поверхностью, разделенные на четыре сектора, обозначенные соответственно группам крови.

4. Маркированные для каждой группы крови и серии сывороток пипетки.

5. Стеклянные или пластмассовые палочки с округлыми концами для перемешивания крови.

Техника выполнения:

1. На краю пластинки (тарелки) пишут фамилию и инициалы пациента.

2. Под соответствующими обозначениями на пластинку (тарелку) наносят по капле (приблизительно 0,1 мл) сывороток групп Оαβ(I), Аβ (II), Вα (III) двух серий. Сыворотку берут из каждого флакона отдельной пипеткой, которая затем остается во флаконе.

3. Кровь для исследования берут из места укола мякоти концевой фаланги пальца. Можно также использовать цельную венозную кровь или взвесь эритроцитов после сворачивания или центрифугирования крови с Ht не менее 30%. Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят стеклянной палочкой на пластинку (тарелку) рядом с каплей стандартной сыворотки. Таким образом, соотношение крови и сыворотки получается 1:10.

4. Стеклянной палочкой перемешивают капли крови и сыворотки до равномерного окрашивания смеси в розовый цвет. Необходимо или каждый раз использовать новую палочку, или после каждого перемешивания промывать палочку в стакане с физиологическим раствором и насухо вытирать чистой марлей или ватой.

5. После перемешивания пластинку осторожно покачивают в руках до истечения времени постановки реакции. Этим предотвращается неспецифическая агглютинация эритроцитов («ложная агглютинация»).

6. Результат реакции оценивают через 5 мин. В случае наступления агглютинации с сыворотками всех групп ставится аналогичная реакция с сывороткой четвертой группы, одной серии. Заключение о принадлежности крови к IV группе делается при отсутствии агглютинации с сывороткой IV группы. При сомнительных результатах реакции по истечении 5 минут в капли, где произошла агглютинация можно добавить по 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия и слегка покачать пластинку. «Ложная агглютинация» при этом исчезнет.

Трактовка результатов реакции

Реакция гемагглютинации может быть положительной и отрицательной. При положительной реакции образуются агглютинанты, имеющие вид крупинок или хлопьев, а капля изогемагглютинирующей сыворотки почти полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции сыворотка продолжает оставаться окрашенной в розовый цвет и в ней не обнаруживается агглютинантов. Результаты реакций с сывороткой одной и той же группы разных серий должны совпадать.

Необходимо указать, что в соответствии с новой «Инструкцией по применению компонентов крови» (2002) в отличие от Инструкции 1998 г в технику прямого способа определения групп крови внесены следующие изменения:

· Соотношение крови и сыворотки – 1:10. Ранее – 1:5 – 1:7.

· Добавление физиологического раствора производится только по истечении 5 минут, то есть по истечении срока проведения реакции. Ранее изотонический раствор хлорида натрия добавлялся по мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин. от начала реакции.

Прямой способ определения группы крови даже при технически безупречном выполнении предполагает хотя и очень небольшую (доли процента), но достоверную вероятность ошибки. Основными причинами возможных ошибок являются наличие подгрупп и «кровяные химеры». Для ликвидации возможных ошибок результат прямой реакции перепроверяется перекрестным способом.