Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта

Агглютинация – это склеивание и выпадение в осадок микроорганизмов или других клеток(корпускулярных антигенов) под действием специфических антител в присутствии электролитов.

Развернутая РА в пробирках (объемный способ) применяется для серологической диагностики инфекционных заболеваний, то есть для определения динамики нарастания титра противомикробных антител в сыворотке крови (реакция Видаля - при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля- при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта- при бруцеллезе и др.) и для серологической идентификации микробов.

РА Видаля применяется с целью серодиагностики брюшного тифа и паратифов А и В, то есть для определения антител, и изучения динамики нарастания и сохранения антител против S.typhi, S. paratyphi A и S. paratyphi B, которые обнаруживаются в крови больного со 2-ой недели заболевания.

Компоненты реакции:

1)исследуемая сыворотка крови в разведениях от 1:100 до 1:800;

2) три диагностикума - взвеси убитых сальмонелл: S.typhi, S. paratyphi A и S. paratyphi В;

3) изотопический раствор хлорида натрия (электролит).

Реакция ставится в три ряда пробирок по 5 пробирок в каждом ряду, из которых 4 опытных и одна контрольная (физ.раствор+диагностикум).

Реакцию инкубируют:

1) в термостате в течение 2 часов при 37°С, при этом образуются крупнохлопчатый осадок за счет жгутикового Н-антигена;

2) при комнатной температуре в течение 18-24 часов, выпадает мелкозернистый осадок за счет соматического О-АГ.

Механизм реакции. Реакция протекает в две фазы:

1) соединение АГ с АТ (специфическая фаза);

2) выпадение образовавшегося комплекса АГ-АТ (агглютината) в растворе солей (электролите) в осадок (неспецифическая фаза).

Антигены поливалентны, а антитела двух – (IgG) или более валентны (IgМ). Соединение их приводит к образованию макроконгломератов, выпадающих в осадок.

При учёте реакции сначала просматривают контрольную пробирку. В ней при лёгком встряхивании наблюдается равномерное помутнение, хлопьев не должно быть. Опытные пробирки просматривают одновременно с контрольной, держа в одной руке и встряхивая. При положительной реакции обнаруживаются хлопья из склеенных бактерий. Учитывают максимальное разведение сыворотки, при котором произошла отчетливая агглютинация (титр сыворотки). Диагностический титр равен 1:200, то есть реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки 1:200 и более (рис.28).

Недостатки реакции:

1) реакция положительна начиная со 2-ой недели заболевания;

2) реакция положительна в 3-х случаях: у больных («инфекционная» реакция), у переболевших («анамнестическая») и у вакцинированных («прививочная»).

Для дифференциации реакций прибегают к повторной постановке ее через 5-6 дней. У больных отмечается нарастание титра антител в 4 и более раза. При «прививочной» и «анамнестической» реакциях титр антител не изменится;

3) реакция может быть группоспецифической - положительной с двумя или тремя антигенами. При групповой агглютинации учет реакции проводится по максимальному титру антител.

Реакцию Видаля можно поставить одновременно с Н- и О-антигенами бактерий брюшного тифа, что помогает дифференцировать «инфекционную» от «прививочной», так как у привитых и переболевших обнаруживаются только Н-антитела, О- агглютинин в высоком титре отмечается только в разгар болезни.

РА Вейгеляставится с диангостикумомRicketsia prowazekii (взвесь убитых риккетсий), РА Райта – с бруцеллезным диагностикумом (взвесь убитых бруцелл: B. melitensis, B. abortus и B. suis).

9.3 РПГА – реакция пассивной гемагглютинации (определение напряженности поствакцинального противодифтерийного и противоскарлатинозного антитоксических иммунитетов)

Под РПГА понимают реакцию, в которой АТ-а взаимодействуют с высокодисперсными АГ (гаптенами), предварительно адсорбированными на корпускулярных носителях - эритроцитах, которые при этом склеиваются (рис.29).

Компоненты РПГА, применяемой для определения напряженности поствакцинального противодифтерийного антитоксического иммунитета:

1) испытуемая сыворотка крови в разведениях от 1:10 до 1:20480;

2) диагностикум дифтерийный эритроцитарный – дифтерийный анатоксин, адсорбированный на поверхности эритроцитов;

3) физиологический раствор;

4) противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью 10МЕ/мл;

5) полистероловые пластины (при их отсутствии – пробирки).

Испытуемую сыворотку разводят физ. раствором от 1:10 до 1:20480 в 12 лунках.

Вносят по 1 капле диагностикума в каждую лунку.

Ставят контроли специфичности реакции с иммунной противодифтерийной антисывороткой (положительная реакция) и нормальной сывороткой (отрицательная реакция).

Противодифтерийную контрольную сыворотку (с активностью 10МЕ/мл) разводят от 1:10 до 1:20480 и вносят также по 1 капле диагностикума.

Оставляют при комнатной температуре на 3 часа (максимум на 15-20 часов) и читают реакцию.

При положительной реакции, в результате образования комплекса (АГ-АТ) на поверхности эритроцитов, последние склеиваются и равномерно покрывают все дно пробирки или всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями. При отрицательной реакции эритроциты выпадают в осадок в виде меленького диска с ровными краями («пуговки»).

Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитов.

Расчет активности испытуемой сыворотки производят по формуле:

Х=(10ЧА)/В,

где: Х – активность испытуемой сыворотки в МЕ/мл.;

10 – титр контрольной сыворотки в МЕ/мл.;

А – максимальное разведение испытуемой сыворотки с положительным результатом;

В – максимальное разведение контрольной сыворотки с положительным результатом.

Неиммунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мл. (1:20).

РПГА с целью определения напряженности противоскарлатинозного антитоксического иммунитетаставятсанатоксином S. pyogenes, адсорбированным на поверхности эритроцитов.

9.4 Реакция преципитации (РП): термопреципитации по Асколи и РП в геле по Оухтерлони

Преципитация и агглютинация – это довольно сходные реакции, которые различаются главным образом на основании физических свойств АГ. В первом случае он представлен в растворимой, во втором – в корпускулрной формах. В основе РП лежит образование преципитата в процессе реакции АГ-АТ.

РП высоко специфична и чувствительна.

Ингредиенты реакции:

1) растворимый АГ или гаптен (преципититоген);

2) АТ-преципитины (иммунная преципитирующая сыворотка; получают иммунизацией кроликов соответствующими АГ);

3) изотонический раствор хлорида натрия или агаровый гель.

Методы постановки РП:

1. РП в растворах – реакция кольцепреципитации;

2. РП в геле.