Разделение белков по молекулярной массе

Гель-хроматография

Хроматографическую колонку заполняют гранулами геля (сефадекс), который имеет поры определенной величины (рис.10). В колонку вносят смесь белков. Белки, размер которых меньше, чем размер пор сефадекса, задерживаются в колонке, так как «застревают» в порах, а остальные свободно выходят из колонки. Размер белка зависит от его молекулярной массы

Рис. 10. Метод гель-хроматографии.

Ультрацентрифугирование

Этот метод основан на различной скорости седиментации (осаждения) белковых молекул в растворах с различным градиентом плотности (сахарозный буфер или хлорид цезия) (рис. 11).

Рис. 11. Метод ультрацентрифугирования.

Электрофорез

Данный метод основан на различной скорости миграции белков и пептидов в электрическом поле в зависимости от их заряда.

Носителями для электрофореза могут служить гели, ацетатцеллюлоза, агар, бумага. Под действием электрического тока разделяемые молекулы движутся в геле в зависимости от размера: те из них, которые имеют большие размеры, будут задерживаться при прохождении через поры геля. Меньшие молекулы будут встречать меньшее сопротивление и, соответственно, двигаться быстрее. В результате, после проведения электрофореза, большие молекулы будут находиться ближе к старту, чем меньшие (рис. 12).

Рис. 12. Электрофорез.