Методы разделения и концентрирования, используемые в биофармацевтическом анализе.

Разделение и концентрирование проводят в случае, если: 1) проба содержит компоненты, мешающие определению 2) концентрация определяемого компонента ниже предела обнаружения метода; 3) определяемые компоненты неравномерно распределены в пробе.Разделение –процесс распределения компонентов между двумя фазами, которые затем отделяют друг от друга. Процесс концентрирования имеет много общего с процессом разделения в технике выполнения и в теоретическом аспекте. Концентрирование – операция (процесс), в результате которой повышается отношение концентрации или количества микрокомпонентов к концентрации или количеству макрокомпонента. Отличие: При разделении концентрации компонентов могут быть близки, а могут и сильно различаться. При концентрировании концентрации компонентов резко различаются. В ходе концентрирования микроколичество вещества а) собирается в меньшем объеме или массе – абсолютное концентрирование; б) отделяется от макрокомпонента таким образом, что отношение концентрации микрокомпонента к концентрации макрокомпонента повышается –относительное концентрирование. При относительном концентрировании происходит замена матрицы, затрудняющей анализ, на иную -органическую или неорганическую. При разделении и концентрировании предпочтительно распределение между двумя фазами, такими, как: Ж-Ж, Ж-Г, Ж-Т, Т-Г. Основные методы разделения. Осаждение и соосаждение, экстракция, хроматографические методы, электрохимические методы, методы испарения, кинетические методы. Осаждение - разделение основано на различии растворимости. Осаждение используют, как правило, для разделения неорганических веществ. Экстракция – извлечение, выдергивание - метод разделения, выделения и концентрирования. Основана на физико-химическом процессе распределения вещества между двумя несмешивающимися фазами, чаще – водной и органической. Экстракция широко используется для разделения смесей элементов. Электрохимические методы - Электровыделение вещества на твердом электроде в элементном состоянии или в виде какого-то соединения. Для разделения используется разница в потенциалах электровосстановления элементов. Можно выделить группу компонентов, можно –селективно выделить компонент. Методы испарения основаны на различной летучести веществ. Вещество при нагревании переходит из жидкой фазы в газообразную, а затем конденсируется, образуя снова жидкую, иногда твердую фазу.

31. Исследования фармакокинетики лекарственных средств. Основные фармакокинетиче-ские параметры: биодоступность, объём распределения, клиренс, константа скорости элимина-ции, период полуэлиминации.

Фармакокинетика – это раздел фармакологии о всасывании, распределении в организме, метаболизме и выведении веществ. Биологическая доступность - скорость и степень доступности действующего вещества или его активного компонента из дозированной лекарственной формы в месте действия, т.е. какая часть от введенной дозы поступила в общий кровоток. Абсолютную биодоступность данной лекарственной формы определяют путем сравнения с биодоступностью (100%) этого лекарственного средства при условии его внутрисосудистого введения. Относительную биодоступность данной лекарственной формы определяют путем сравнения с биодоступностью другой лекарственной формы, введенной тем же или другим (но не внутривенным) путем. Объем распределения связывает количество лекарства в организме с его концентрацией в плазме. Количественно равен условному объему в котором следовало бы распределить все лекарство, содержащееся в организме, чтобы его концентрация в этом объеме была равна такой в плазме. Величина объема распределения играет важную роль в оценке элиминации лекарственных веществ из организма. Под элиминированием следует понимать совокупность всех процессов метаболизма и выведения, которые приводят к снижению содержания активной формы ЛВ в организме и его концентрации в плазме крови. Элиминация осуществляется через почки, печень, легкие. Константа скорости элиминации (Кel) –указывает, какая часть вещества элиминируется из организма в единицу времени. Период полувыведения – это время, необходимое для снижения концентрации ЛВ в плазме крови в процессе элиминации на половину от исходной. Мерой способности организма элиминировать ЛВ является клиренс. Т.е. клиренс – это отношение скорости элиминации ЛВ всеми возможными путями к его концентрации в плазме крови

32. Метаболизм лекарственных веществ. Основные фазы метаболизма: несинтетическая (реакции окисления, восстановления и гидролиза) и синтетическая (реакции конъюгации).

Попав в организм, большинство ЛВ, будучи ксенобиотиками с липофильными свойствами, вовлекаются в метаболизм и подвергаются в организме химическим превращениям. 2 вида: несинтетические и синтетические. Несинтетические – это превращения за счет окисления, восстановления, гидролиза. Большая часть несинтетических реакций катализируется микросомальными ферментами печени. К ним относятся флавопротеин: НАДФ-Н-цитохром Р-450 редуктазу и гемопротеин: цитохром Р-450, различающихся по своей аффинности для различных субстратов. Часть несинтетических реакций не требует участия микросомальных ферментов и может осуществляться как в печени с участием митохондриальных или цитозольных ферментов, так и в других органах и тканях. Синтетические реакции – это реакции, в основе которых лежит связывание (коньюгация) метаболитов лекарств с глюкуронидной, ацетильной, сульфатной, метильной группами, а также глютатионом или глицином. Все виды коньюгации (исключение глюклронидной) катализируются немикросомальными ферментами. Коньюгация является основным видом метаболизма карбоновых кислот, спиртов, фенолов. В большинстве случаев лекарственного метаболизма несинтетические реакции предшествуют реакциям коньюгации. В результате превращения ЛВ становится более растворимым в воде, что позволяет ускорить его выведение из организма. Метаболизм ЛВ является одним из механизмов их элиминирования.

Биоэквивалентные исследования генерических лекарственных средств. Понятия терапевтической, фармацевтической и биологической эквивалентности. Основные этапы биоэквивалентных исследований.

Генерические лекарственные средства должны удовлетворять тем же стандартам качества, эффективности и безопасности, что и оригинальные лекарственные средства, но при этом дополнительно должно быть предоставлено убедительное подтверждение того, что они эквивалентны, ранее зарегистрированным анало-

гичным лекарственным средствам и клинически взаимозаменяемы с ними. Оценка биоэквивалентности генерических лекарственных средств (средств, содержащих одно и тоже лекарственное вещество в одинаковой дозе и в той же лекарственной форме, что и оригинальное лекарственное средство) считается основным видом медико-биологического контроля их эффективности. Оценка биодоступности генерических лекарственных средств выполняется в случаях, если средство содержит одно и то же лекарственное вещество в одинаковой дозе, но при этом имеет отличную лекарственную форму от оригинального лекарственного средства.

Терапевтическая эквивалентность (therapeutic equivalence)Лекарственное средство является терапевтически эквивалентным другому лекарственному средству, если оно фармацевтически эквивалентно ему и после приема в одной и той же молярной дозе его клиническое воздействие с точки зрения и эффективности и безопастности, будет по существу одинаковым средству, эффективность и безопасность которого установлена, о чем видетельствуют данные соответствующих исследований (биоэквивалентности, фармакодинамические, клинические или иследования invitro. Фармацевтическая эквивалентность (pharmaceutical equivalence)

Лекарственные средства являются фармацевтически эквивалентными, если они содержат одинаковое количество одного и того же активного вещества (или веществ) в одной и той же лекарственной форме, соответствуют одним и тем же сопоставимым стандартам и применяются одинаковым способом. Однако, фармацев-

тическая эквивалентность не обязательно предполагает биологическую или терапевтическую эквивалентность, так как различия в наполнителях и\или в процессе производства могут приводить к различиям в эффективности препарата.Биологическая эквивалентность (биоэквивалентность, bioequivalence). Два лекарственных средства биологически эквивалентны, если они фармацевтически эквивалентны или они фармацевтически альтернативны и их биологические доступности (скорость и степень доступности), после приема в одной и той же молярной дозе, похожи до такой степени, что можно предполагать, что их терапевтические эффекты и показатели безопасности будут по существу одинаковыми.

Методы исследований эквивалентности:Для фармацевтически эквивалентных или альтернативных лекарственныхсредств должна быть доказана терапевтическая эквивалентность к другому средству

для установления факта взаимозаменяемости. Некоторые методы таких исследований приведены ниже:

· Сравнительные исследования по оценке биологической доступности (биологической эквивалентности) на людях, при которых измеряется концентрация активного ингредиента лекарственного средства либо одного или более метаболитов в доступной биологической жидкости, например, плазма, кровь или моча.

· Сравнительные фармакодинамические исследования на людях.

· Сравнительные клинические испытания.

· Определение сравнительной кинетики растворения in vitro ("в пробирке") в трех буферных растворах. Другие методы, которые также могут быть использованы для оценки биологической эквивалентности, например, исследования биологической эквивалентности на животных, допускаются лишь в особо оговоренных случаях. Выбор процедуры исследования зависит от многих факторов, включая характеристику активного действующего вещества, лекарственного средства и наличие необходимых ресурсов для его проведения.