Способы выращивания клеток животных

Глубинное выращивание клеток в монослое. Направлено на получение наибольшей концентрации клеток в наименьшем объеме газовой фазы. При этом клетки животных размножаются, растут и развиваются в прикрепленном состоянии до тех пор, пока не сольются в монослой. Рост клеток в виде монослоя зависит от белков – фибронектинов (от лат. fibro – нить, nectere – связывать или соединять). Фибронектин – гликопротеин, обеспечивает межклеточную адгезию, прикрепление клеток к подложке, направляет их перемещение.

Прикрепление клеток зависит от следующих свойств субстрата: гидрофильность – адгезивные свойства более выражены для смачиваемых поверхностей; протяженность – поверхность субстрата должна быть больше нормальной длины клетки; горизонтальность – растущие клетки распространяются в направлении наименьшей кривизны субстрата. Например, если принять прикрепление клеток к агар-агару за единицу, то к полиэтилену они прикрепляются лучше в 8 раз, к резине – в 12 раз, к стеклу – в 16 раз, а к стали – в 20 раз.

В монослое выращивают клетки соединительной ткани (фибробласты), клетки почек кроликов, обезьян, собак, 10-14-дневных куриных эмбрионов. Выращивание проводят в строго асептических условиях при покачивании для омывания большей площади культуральной среды. Клетки попеременно погружают в жидкую и газообразную фазу, при этом с избытком обеспечивается потребность в кислороде.

Во время культивирования клеток учитываются следующие параметры: константные – качество материала, форма и объем культиватора; вариабельные – скорость покачивания, качество и объем среды, тип клеток и размер посевного материала, рН и температура среды, снабжение кислородом и содержание СО₂ в культиваторе, окислительно-восстановительный потенциал, концентрация основных источников питания.

Глубинное выращивание клеток в суспензированных культурах. При использовании микроносителей, суспендируемых в питательной среде, площадь выращиваемых клеток увеличивается. Клетки закрепляются на их поверхности, а затем разрастаются в виде монослоя. В таких системах совмещаются монослойные и суспензионные культуры клеток животных.

Применяют следующие микроносители: положительно заряженные ДЕАЕ-сефадексы (комбинация высокомолекулярного полимера декстрана с ионообменными смолами); сефадексы с коллагеновым покрытием (высокомолекулярный полимер декстрана); отрицательно заряженный полистирол; полые стеклянные сферы; микроносители из пористого шлачного стекла и др. После выращивания клетки отделяют от микроносителей центрифугированием; фильтрованием; обработкой трипсином с последующим промыванием и сепарированием.

Данный метод применяется для получения вирусных вакцин (против бешенства, полиомиелита, ящура).