Приготовление инокулята
Выросшие культуры тест-штаммов бактерий (в том числе, С. sporogenes, выращенную в анаэробных условиях) и С. albicans смывают с поверхности скошенного агара стерильным 0,9 % раствором натрия хлорида. Готовят взвесь каждого тест-штамма, соответствующую 10 ЕД по оптическому стандартному образцу мутности.
Таблица 3 - Тест-штаммы микроорганизмов, используемые для определения ростовых свойств питательных сред и проверки антимикробного действия препарата*
| Питательные среды | Тест-штаммы микроорганизмов | Условия инкубации | |
| Температура | Время | ||
| Жидкая тиогликолевая среда | Аэробные бактерии: | 32,5 ± 2,5оС | 3 сут |
| Bacillus subtilis ГКПМ 010011, АТСС 6633 или Вacillus cereus ГКПМ 010014, ATCC 10702 | |||
| Staphylococcus aureus ГКПМ 201108, ATCC 6538 | |||
| Pseudomonas aeruginosa ГКПМ 190155, ATCC 9027 | |||
| Alcaligenes faecalis 415** ГКПМ 300205 | 2 сут | ||
| Анаэробные бактерии: | 3 сут | ||
| Clostridium sporogenes 272 ГКПМ 300524, ATCC 19404 | |||
| Clostridium novyi 198** ГКПМ 242484 | 2 сут | ||
| Грибы**: | 22,5 ± 2,5оС | 5 сут | |
| Candida albicans NCTC885-653, АТСС 10231 | |||
| Жидкая соево-казеиновая среда | Аэробные бактерии: | 32,5 ± 2,5оС | 3 сут |
| Bacillus subtilis ГКПМ 010011, АТСС 6633 или Вacillus cereus ГКПМ 010014, ATCC 10702 | |||
| Грибы: | 22,5 ± 2,5оС | 5 сут | |
| Candida albicans NCTC 885-653, АТСС 10231 | |||
| Aspergillus brasiliensis АТСС 9642, АТСС 16404 | |||
| Жидкая среда Сабуро | Грибы: | 22,5 ± 2,5оС | 5 сут |
| Candida albicans NCTC 885-653, АТСС 10231 | |||
| Aspergillus brasiliensis АТСС 9642, АТСС 16404 |
*могут быть использованы и другие тест-штаммы из различных коллекций, типичные по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам. Набор тест-штаммов может быть изменен в зависимости от способа применения или состава испытуемого препарата.
** обозначены тест-штаммы для случаев использования тиогликолевой среды в качестве универсальной при испытании ИЛП. Культивирование производят при двух температурных режимах: ( 32,5±2,5) оС и (22,5±2,5) оС.
Концентрацию клеток В. subtilis, C. albicans, A. brasiliensis доводят до 1∙107 КОЕ/мл; S. aureus, P. aeruginosa, C. sporogenes, A. faecalis – до 1∙109 КОЕ/мл. Культуру C.novyi, выращенную на жидкой среде культивирования для анаэробных микроорганизмов (2 пересева), после центрифугирования 3000 об/мин в течение 20 мин разводят стерильной жидкостью следующего состава:
· натрия хлорид - 8,5 г,
· тиогликолевая кислота - 0,3 мл,
· вода очищенная - 1000 мл,
рН 7,2±0,2 после стерилизации
Для смыва конидий A. brasiliensisиспользуют стерильный 0,9 % раствор натрия хлорида, содержащий 0,05 % твина-80. Количество конидий в 1 мл смыва определяют с помощью камеры Горяева или посевом подходящего разведения на агар Сабуро или среду № 2.
Стандартизованные взвеси бактерий и грибов доводят стерильным
0,9 % раствором натрия хлорида методом последовательных десятикратных разведений до концентрации 10-100 КОЕ/мл для посева в жидкие и полужидкие питательные среды для определения их ростовых свойств.
Для подтверждения полученной концентрации инокуляты бактерий, в том числе, С. sporogenes (при условии инкубации последнего в анаэростате), высевают на соево-казеиновый агар (среду № 1 или специализированную среду для клостридий соответственно) по 0,1 мл из взвеси с концентрацией 103 КОЕ/мл, C. novyi – на специальную среду для клостридий. Инокуляты грибов высевают на агар Сабуро (или среду № 2).
Дата добавления: 2016-01-30; просмотров: 2245;