Общие методы количественного определения
1. Алкалиметрический метод (вариант нейтрализации) определения аминокислот, содержащих две карбоксильные группы. При правильном подборе индикатора данные соединения могут титроваться как одноосновные кислоты (карбоксильная группа – в γ-положении).
ФС ХII для кислоты глутаминовой (субстанция и таблетки). Алкалиметрия по бромтимоловому синему до перехода желтой окраски в голубовато-зеленую (рН 6,0 – 7,6) или нейтральному красному.
Кстех = 1/1; fэкв = 1,
то есть в реакции нейтрализуется одна карбоксильная группа
Для других АК метод возможен только в смешанных растворителях (в среде органических растворителей: диметилформамида, ацетона, этилового и пропилового спиртов). Органические растворители подавляют ионизацию аминогрупп, это позволяет титровать препараты аминокислот водными растворами натрия гидроксида. Индикатор – тимоловый синий
2. Метод Кьельдаля (классический вариант ГФ). Определение общего азота для всех аминокислот.
1 стадия. В колбу Кьельдаля помещают точную навеску вещества, добавляют концентрированную серную кислоту и смесь сульфата калия и сульфата меди (для увеличения Т°кипения), нагревают. Смесь кипятят до тех пор, пока раствор не просветлеет (станет светло-зеленым). и После этого продолжают сжигание (минерализацию) в течение 30 минут (для метионина 4-4,5 часа). Образуются неорганические соединения: вода, углекислый газ и сульфат аммония.
>t°
C→CO2; N→(NH4)2SO4→NH3
2 стадия. После этого к охлажденной смеси добавляют воду, подсоединяют колбу к парообразователю, добавляют избыток 30% гидроксида натрия (для нейтрализации H2SO4) и пропускают пар. Азот органического соединения, после минерализации его связанный серной кислотой в сульфат аммония, отгоняют с водяным паром количественно в виде аммиака в приемник с борной кислотой. Образуется смесь метабората и тетрабората аммония.
3 стадия. Смесь после полного окончания перегонки титруется 0,1М хлороводордной кислотой. Индикатор смешанный: метиловый красный и метиленовый синий 1:1 или м/о + м/с.
Параллельно проводят контрольный опыт.
Расчет может проводится двумя способами:
- на содержание азота в препарате в процентах, тогда всегда Э = А.м. Этот принцип расчета лежит в основе определения кислоты глутаминовой; согласно ФС, содержание азота в препарате должно быть не менее 9,4 и не более 9,55%.
- на содержание в препарате действующего вещества в процентах, тогда Э=М.м./n, где n – количество атомов азота, содержащихся в молекуле препарата.
3. Формольное титрование по Сёренсену (алкалиметрия после взаимодействия с формальдегидом). Для блокирования аминогруппы предварительно добавляют формальдегид, образуется устойчивое N-метиленпроизводное, усиливаются кислотные свойства аминокислоты. Образовавшееся N-метиленпроизводное (N-метиленденовое (азометиновое)) будет в реакции нейтрализации выступать какдвухосновная кислота. Индикатор – фенолфталеин или потенциометрически.
Кстех = 1/2; fэкв = 1/2; М.э. = М.м/2
Так определяют аминалон, метионин, цистеин, ФС аминокапроновую к-ту.
Аминалон 
Кстех = 1/1; fэкв = 1; М.э. = М.м
4. Ацидиметрический метод неводного титрования (титрование хлорной кислотой в среде безводной уксусной кислоты), для аминокислот с открытой аминогруппой (аминалон ФС, кислота глутаминовая, метионин, цистеин, пеницилламин). В среде безводной уксусной кислоты подавляются кислотные свойства групп кислотного характера и усиливаются основные свойства групп основного характера.
Механизм метода рассмотрим на примере аминалона. При растворении в протогенном растворителе - безводной уксусной кислотe цвиттер-ионная форма аминокислоты переходит в катионную. Индикатор - кристаллический фиолетовый (от фиолетового до зеленого окрашивания).
f экв.(глутаминовой к-ты) = 1
5. Спектрофотометрический метод в видимой области спектра. Для получения окрашенных продуктов используют реакцию с нингидрином (гранулы кислоты глутаминовой для детей). У окрашенных продуктов определяют оптическую плотность. Расчет проводят по стандартному раствору.
6. Поляриметрический метод расчет по значению угла вращения и удельному вращению.
Хранение: ХУТ, защищающая от действия света.
Дата добавления: 2015-09-07; просмотров: 8964;