По системе АВО.

Группы крови определяют по стандартным сывороткам (простая реакция), стандартным эритроцитам (двойная или перекрестная реакция) и с помощью циклонов.

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки. Для определениягрупповой принадлежности крови у человека используются три стандартные сыворотки 0(I), A(II), B(III), и реже - AB(IV) группы. Они готовятся главным образом из крови, редко из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Чаще всего кровь берется от доноров , может быть использована трупная или ретроплацентарная кровь. После отстаивания крови забирается сыворотка, к которой добавляется консервирующее вещество – борная кислота из расчета 3,0 порошка на 100мл сыворотки, но лучше прибавлять ее немного больше. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки должны удовлетворять следующим требованиям:

1. В течение 15 – 20 с. должна появиться агглютинация с соответствующими эритроцитами, а через 2 минуты агглютинация должна быть четкой.

2. Не давать агглютинации с эритроцитами нулевой группы и одноименной.

3. Иметь титр не ниже 1:32.

4. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков бактериального загрязнения.

5. На каждой ампуле должен быть паспорт с обозначением группы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы (одна, две, три, четыре).

Для предупреждения возможных ошибок при определении групп крови производится окраска стандартных изогемагглютинирующих сывороток:

Группы A(II) – в синий цвет, B(III) - в розовый, AB(IV) – синий, 0(I) – не окрашивается, хранятся сыворотки при температуре +8 - 9º герметично закрытыми. Используют активные стандартные сыворотки трех групп (0, А, В) с титром не ниже 1:32, двух серий.

Методика определения группы крови: определение группы крови производят при температуре от +15 до +20ºС. на тарелках или планшетах. На левой стороне планшета надписывают группы крови в буквенной транскрипции. Посередине верхнего края планшета отмечают фамилию донора (реципиента). Используют стандартные сыворотки двух серий трех групп (О, А, В) с титром не ниже 1:32. На тарелку или планшет наносят по одной-две капли стандартных сывороток в два ряда, начиная с первой группы слева направо. Капли крови наносят пипеткой около каждой капли сыворотки и смешивают углом предметного стекла. Количество крови должно быть в 8 – 10 раз меньше, чем сыворотки. Затем планшет осторожно покачивают в руках, что способствует быстрой и четкой агглютинации. Агглютинация начинается на 3 минуте. По мере наступления агглютинации, добавляют по одной капле физиологического раствора и продолжают наблюдать до истечения 5 минут. Результат читают в проходящем дневном свете, если агглютинация нечеткая, к смеси добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего дают окончательное заключение о групповой принадлежности.

1. Отсутствие агглютинации во всех трех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(I).

2. Наступление агглютинации в каплях с сыворотками 0(I) и B(III) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген А, т. е. кровь относится к группе A(II).

3. Наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы 0(I) и A(II) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, т. е. кровь группы B(III).

4. Агглютинация во всех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, т. е. кровь относится к группе AB(IV). Однако в этом случае учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо нанести на планшет или тарелку две-три капли стандартной сыворотки группы AB(IV) и добавить к ним 1 каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают, и результат реакции наблюдают в течение 5 минут. Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к группе AB(IV). Если же агглютинация появляется с сывороткой группы AB(IV), значит, реакция неспецифическая.

Определение группы крови двойной реакцией(по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам).

Данная методика позволяет определить наличие в крови агглютиногенов А и В, агглютининов α и β, т. е. определить полную формулу крови

Определение групповой принадлежности крови с использованием цоликлонов анти – А и анти – В. Цоликлоны анти – А и анти – В являются продуктом гибридомных клеточных линий. Это моноклональные анти – А и анти – В антитела, которые продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти – А и анти – В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса (I, G, M), направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови.

Могут зависеть от трех причин:

· технических;

· неполноценности стандартных сывороток и стандартных эритроцитов;

· биологических особенностей испытуемой крови.

Ошибки по техническим причинам:

· неправильное расположение сывороток на планшете. Вместо нанесенных сывороток группы (В) справа их наносят слева;

· неправильное количественное соотношение сывороток и эритроцитов;

· применение недостаточно чистых планшетов и других предметов, соприкасающихся с кровью;

· для каждой сыворотки должна быть отдельная пипетка. Для промывания пипеток следует применять только физиологический раствор хлорида натрия;

· неправильная запись исследуемой крови;

· несоблюдение положенного для реакции агглютинации времени.

При поспешности, когда реакцию учитывают до истечения 5 минут, агглютинация может не наступить, если в испытуемой крови имеются слабые агглютиногены. При передержанной более 5 минут реакции может произойти подсыхание капель с краев, симулирующие агглютинацию, что также приведет к ошибочному заключению.

Ошибки, зависящие от применения неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов:

· слабые стандартные сыворотки с титром ниже 1:32 или истекшим сроком годности могут вызвать позднюю и слабую агглютинацию;

· применение негодных стандартных сывороток и эритроцитов, нарушение стерильности.

Ошибки от биологических особенностей крови:

· наличие в крови слабых агглютиногенов

· кровь обладает свойством панагглютинации или аутоагглютинации, т. е. дает неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками и даже с собственной.

Резус – фактор (Rh –фактор).

Резус – фактор впервые описан в 1940 г. К.Ландштейнером и А. Винером как новое иммунологическое свойство крови, присущее большинству людей.

Резус – фактор находится на эритроцитах людей независимо от возраста и пола и не связан с системой АВО. Находясь на эритроцитах человека наряду с агглютиногенами А и В, резусагглютиноген не имеет в сыворотке соответствующих антител – антирезус, подобных α или β, но антитела могут выработаться у лиц с резус – отрицательной кровью под влиянием систематического попадания в организм таких лиц Rh – антигена.

Подобное может быть при условии: переливание человеку резус – отрицательному, резус – положительной крови. Когда у беременной резус – отрицательной женщины развивается резус – положительный плод.

Резус – фактор является сильным, тепловым антигеном, так как при введении в организм резус – отрицательных лиц может вызвать в нем продукцию специфических резус – антител. Оптимальной температурой для определения резус – агглютиногена в эритроцитах является 45 - 48º С (в чашках Петри).

Определение резус – фактора и резус – антител.

Определение резус – принадлежности крови доноров проводят в два этапа:

1. Применение стандартного универсального реагента антирезус Rhο(D). 2. Затем со стандартным универсальным реагентом анти - Rh’о(DC), а также со стандартной сывороткой анти - Rh’’’о(DCE). Если исследуемая кровь дала положительную реакцию (агглютинацию) с одним из указанных реагентов, то она считается резус – положительной.

Техника определенияНа дно пробирки нанести 1 каплю стандартного реагента и 1 каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Содержимое перемешать, встряхнуть и медленно наклонить пробирку горизонтально, чтобы содержимое растеклось по стенке пробирки. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку необходимо добавить 2 – 3 мл 0,9% раствора NaCI и перемешать, не взбалтывая, путем 2 – 3 кратного перевертывания. Наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветленной жидкости указывает на резус – положительную реакцию крови Rh+. Отсутствие агглютинации (гомогенно окрашенная жидкость) указывает на отрицательную реакцию крови (Rh-).