Подсчет форменных элементов крови.

(а) Подсчет эритроцитов.

Кровь разводят в 200 раз, используя 3% раствор NaCl. Подсчёт клеток проводят в камере Горяева, где объём разбавленной крови над одним маленьким квадратом составляет 1/20*1/20*1/10 = 1/4000 мм³ (или мкл).

При большом увеличении микроскопа считают количество клеток в 80 маленьких квадратах. В каждом квадрате считают клетки, находящиеся внутри квадрата, а также клетки, попавшие на верхнюю и левую его стороны.

Формула для расчета количества эритроцитов в 1 мкл:

Кол-во клеток в 80 мал кв.*200*4000/80

Нормальный показатель – 4-5 млн в мкл (или 4-5*10¹² в литре)

(б) Подсчёт лейкоцитов.

Кровь разводят в 20 раз раствором уксусной кислоты (для гемолиза клеток) с добавлением метиленовой сини (для окрашивания ядер лейкоцитов). Подсчёт проводят под малым увеличением микроскопа в 25 больших квадрат, что составляет 400 малых квадратиков.

Формула для расчёта количества лейкоцитов в 1 мкл:

Кол-во клеток в 400 мал.кв.*20*4000/400

Нормальный показатель – 6-9 тыс в мкл (или 6-9*10⁹ в литре)

3. Методы определения времени свёртывания крови и остановки кровотечения.

(а) Определение времени остановки кровотечения.

Этот показатель характеризует состояние первичного (сосудисто-тромбоцитарного) гемостаза. Используется видоизмененный метод Дюке: после неглубокого прокола пальца через каждые 20-30 сек промокают каплю выступившей крови с помощью фильтровальной бумаги до полной остановки кровотечения. Нормальный показатель – 1-3 минуты.

(б) Определение времени свёртывания крови.

Этот показатель характеризует состояние вторичного (коагуляционного) гемостаза. Используется метод Сухарева: в среднюю часть стеклянного капилляра помещают столбик крови и, периодически наклоняя капилляр, отмечают время до того момента, когда кровь перестанет перетекать по капилляру. Нормальный показатель – 5-10 минут (зависит от температуры воздуха в лаборатории).

4. Методы оценки внешнего (протромбиновое время) и внутреннего (АЧТВ – активированное частичное тромбопластиновое время) путей коагуляционного гемостаза.

ПРОТРОМБИНОВОЕ ВРЕМЯ (ПТВ)

Цитратную кровь центрифугируют. К образцу плазмы добавляют избыток кальция, чтобы восстановить её способность свёртываться. Добавляют тканевой фактор (ТФ III) и засекают время до образования сгустка.

В норме ПТВ = 11 – 16 сек.

ПРОТРОМБИНОВЫЙ ИНДЕКС (ПТИ)

рассчитывают как отношение ПТВ контрольной плазмы к ПТВ плазмы пациента. ПТИ выражают в процентах.

АКТИВИРОВАННОЕ ЧАСТИЧНОЕ ТРОМБОПЛАСТИНОВОЕ ВРЕМЯ

К цитратной плазме пациента добавляют не тканевой фактор, а каолин и фосфолипиды, чтобы активировать внутренний путь образования протромбиназы. Затем добавляют кальций и измеряют время до образования сгустка. В норме АЧТВ = 25 – 39 сек

Для нормального АЧТВ необходимы факторы I, II, V, VIII, IX, X, XI, XII. Чтобы выяснить, какого ф-ра нет в плазме пациента, его плазму смешивают с разными плазмами, дефицитными по разным ф-рам свёртывания. Свёртывание не произойдёт только в том случае, если в диагностической плазме и плазме пациента отсутствует один и тот же фактор.