Лейкоцитарная формула-показатель, включающий определение основных видов лейкоцитов и представляющий их процентное соотношение

Методы определения:
•микроскопия мазка крови врачом-лаборантом с подсчетом лейкоцитарной формулы на 100 клеток
•проточная цитометрия с лазерной детекцией (автоматический гематологический анализатор) - автоматический анализатор выдает результаты в виде процентного содержания нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов.

Обобщенные результаты показателей лейкоцитарной формулы у взрослых:
•нейтрофилы палочкоядерные 2-4 % (0,080-0,350 х109 /л)
•нейтрофилы сегментоядерные 47 - 67 % (2,000 - 5,900 х109 /л)
•эозинофилы 0,5 - 5,0 % (0,020 - 0,440 х109 /л)
•базофилы 0 - 1 % (0 - 0,088 х109 /л)
•лимфоциты 25 - 35 % (1,000 - 3,000 х109 /л)
•моноциты 2 - 6 % (0,080-0,530х 109 /л)

Принцип. Микроскопическое исследование сухих фиксированных и окрашенных мазков крови с дифференциальным подсчетом лейкоцитов с расчетом их процентного соотношения.

Для окраски используются азур-эозиновые смеси. Фиксированные на предметном стекле сухие мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с раствором красителя и выдерживают в нем строго определенное время - от 20 до 45 мин.

Микроскопическое исследование: микроскоп, 11-клавишный счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы.

Просматривают мазок крови под малым увеличением (объектив - 10х, окуляр - 7х). Подсчитывают только целые, неразрушенные клетки.

Если в анализе крови не было выявлено отклонений от нормы при подсчете первых 100 лейкоцитов, то ограничиваются подсчетом этого количества клеток.

3. Подсчет форменных элементов крови Работы 3.2 и 3.8 –стр.77 и 85

Подсчет количества эритроцитов производится в камере Горяева. Кровь разводят в 200 раз 3% раствором NaCl (гипертонический раствор). Считают количество клеток в 80 маленьких квадратах (сторона квадрата 1 / 20 мм, площадь квадрата 1 / 400 мм², объем крови над одним маленьким квадратом 1 / 4000 мм³). Формула для подсчета эритроцитов:

Э = (количество клеток в 80 квадратах : 80) х 200 х 4000 (в норме 4-5 х 10¹² в литре)

Подсчет количества лейкоцитов производится в камере Горяева. Кровь разводят в 20 раз раствором уксусной к-ты с метиленовым синим (для гемолиза клеток и окрашивания ядер лейкоцитов). Считают количество лейкоцитов в 25 больших квадратов (это 400 маленьких кв)

Объем крови над одним маленьким квадратом 1 / 4000 мм³. Формула для подсчета лейкоцитов:

Л = (количество клеток в 400 квадратах : 400) х 20 х 4000 (в норме 4-9 х 10⁹ в литре)

4. Методы определения времени свертывания крови и остановки кровотеченияРаботы 3.9 и3.10 – стр.86 и 87

Оценка первичного гемостаза: проба Дюке – определение времени остановки кровотечения (прокалывают палец и через каждые 20-30 секунд фильтровальной бумагой снимают каплю крови; пятна на бумаге становятся все меньше и, наконец, исчезают). В норме время остановки кровотечения 1-3 мин. (Например, удлиняется при тромбоцитопении).

Оценка вторичного гемостаза: метод Сухарева – определение времени свертывания крови (небольшое количество крови в стеклянном каприлляре перестает перетекать при наклонах капилляра, как только кровь свернется). В норме время свертывания крови 5-10 мин (например, удлиняется при гемофилии, что связано с дефицитом одного из факторов – XI, IX или VIII).

5. Методы оценки внешнего (определение протромбинового времени) и внутреннего (определение активированного частичного тромбопластинового времени АЧТВ) путей коагуляционного гемостаза Работа 3.11 – стр.91 +учебник

АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время -(АПТВ -активированное парциальное тромбопластиновое время ,каолин-кефалиновое время) – показатель системы свертывания крови, отражающий в большей степени, работу "внутреннего пути" свертывания крови. Основные показания к применению: общая оценка системы свертывания крови (выявление причин тромбозов и кровотечений).

АЧТВ представляет собой время, которое необходимо для образования сгустка фибрина в плазме крови после добавления к ней каолин-кефалинового реактива и раствора кальция хлорида. Плазма, взаимодействуя с частицами каолина, стимулирует производство активного фактора XII-XIIa, предоставляя поверхность для функционирования высокомолекулярного кининогена, калликреина и фактора XIIa. Фосфолипиды необходимы для образования комплексов с активным фактором X (Xa) и протромбином. После инкубации в реакционную смесь добавляют хлорид кальция, имитируя запуск свертывания по внутреннему пути. Таким образом можно обнаружить возможный дефицит факторов свертывания или наличие ингибиторов свертывания.
АЧТВ отражает работу, так называемого, «внутреннего пути» и общего каскада свертывающей системы крови человека. Внутренний путь свертывания инициируется без участия тканевого тромбопластина. В нем принимают участие калликреин-кининовая система, тромбоциты и факторы свертывания - VIII, IX, XI, X, XII. АЧТВ показывает дефицит (отсутствие) или ненормальную работу одного или нескольких факторов свертывания - II, V, VIII, IX, X, XI, XII (исключая фактор VII - проконвертин и XIII- фибринстабилизирующий фактор) и отражает воздействие на систему свертывания препаратов, особенно гепарина и других ингибиторов свертывания.

Удлинение АЧТВ указывает на склонность к кровотечению. Применять этот вид исследования целесообразно одновременно с определением протромбинового времени.

Метод исследования - метод детекции бокового светорассеяния, определение процента по конечной точке. Единицы измерения – секунды (25,9 - 38,2 сек). Для исследования используют венозную кровь.

Длительное АЧТВ (которое несет в себе все признаки гипокоагуляции) характерно при дефиците фибриногена, а также при заболеваниях печени, присутствии гепарина, дефиците витамина К.

Укорочение АЧТВ более, чем на 5 секунд, может свидетельствовать об активизации гиперкоагуляции (внутреннего пути гемостаза).

Определение показателей АПТВ и АЧТВ является одним из фундаментальных тестов на время свертываемости крови.

6. Оценка кислотно-щелочного состояния организма учебник

Показатель рН – 7.35 – 7.4(отрицательный логарифм концентрации водородных ионов) – влияет на ход всех биохимических реакций в организме.

При показателе pH = 7,0 концентрация H+ составляет 10^-7 или 1/10⁷. При этом значении pH среда является нейтральной, поскольку концентрации OH^- и H⁺ равны: H₂O → H⁺ + OH^-

При pH = 1, концентрация H⁺ составляет 10^-1 или 1/10, среда при этом является очень концентрированной кислотой.

pH 7,0 = нейтральная среда

pH > 7 = щелочная среда

pH < 7 = кислая среда

Сдвиг рН в кислую сторону называется ацидозом, сдвиг в щелочную сторону – алкалозом. Регуляция рН:(1) В крови имеются буферные системы, которые могут связывать водородные и гидроксильные ионы и, таким образом, уменьшать колебания рН (доли секунды); (2) дыхательная система – удаление СО₂ легкими (несколько минут); (3) выделительная функция почек – выведение кислых и щелочных продуктов обмена; самый медленный механизм (часы, дни), но самый мощный.

Буферные системы крови: (1) бикарбонатный буфер (угольная кислота и бикарбонат натрия) – буферная система крови; (2) фосфатный буфер (гидрофосфат и дигидрофосфат натрия) – буферная система крови, почечных канальцев, а также внутриклеточная буферная система многих тканей; (3) гемоглобиновый буфер (восстановленный гемоглобин ННв и калиевая соль оксигенированного гемоглобина КНвО₂) – буферная система эритроцитов, самая мощная (75% общей буферной емкости); (4) белковый буфер (амфолитные свойства белков) – буферная система крови, а также внутриклеточная буферная система.

Главные показатели кислотно-щелочного состояния: (1) рН = 7.35-7.4; (2) концентрация бикарбонатов в плазме крови = 24 ммоль/л или ВЕ (buffer excess – избыток оснований) = 0; (3) напряжение СО₂ артериальной крови = 40 мм рт.ст.