Методики определения Hb, подсчета эритроцитов, времени свертывания, времени кровотечения.

1. Определение Hb цианметгемоглобиновым методом: основан на окислении гемоглобина при действии красной кровяной соли в метгемоглобин, который с CN- ионами образует стабильный , окрашенный в красный цвет комплекс – цианметгемоглобин (CNMetHb). Концентрация его может быть измерена на спектрофотометре, гемоглобинометре.

Содержание гемоглобина в периферической крови в норме у мужчин составляет 132-164 г/л, у женщин – 115-145г/л. Снижение концентрации гемоглобина – основной лабораторный признак анемии любой этиологии. Повышается у людей, живущих в высокогорье.

2. Подсчёт эритроцитов: для подсчета эритроцитов в камере кровь разводят в 200 раз в 3,5% растворе хлорида натрия, для чего 0,02 мл крови вносят в предварительно отмеренные 4 мл разводящего раствора. Взвесь тщательно перемешивают и затем заполняют счетную камеру. Подсчет производят спустя 1 мин (когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40 и окуляром 7.

Для подстчета- сетка Горяева. Она состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на малые, по 16 квадратов в каждом. Под­счет эритроцитов производят в 5 больших квадратах, разделенных на малые, придерживаясь определенной последовательности счета: передвигаются из квадрата в квадрат по горизонтали, один ряд слева направо, следующий — справа налево. Число эритроцитов в 5 больших квадратах пересчитывают на содержание их в 1 л. Нормальное число эритроцитов у женщин 3,4— 5,0* 10¹², у мужчин — 4,0—5,6- 10¹² в 1 л крови.

Число эритроцитов можно определять и с помощью приборов, эритрогемометры и электрофотоколориметр.

3. Определение времени свёртывания: характеризует свертываемость крови в целом и не отражает отдельных фаз свертывания. Оно удлиняется при повышении антикоагулянтной активности крови или снижении концентрации прокоагулянтов, укорачивается при наклонности к тромбообразованию. Наибольшее замедление свертывания (до нескольких часов) наблюдается при гемофилии А.

Для определения свертывания взятую из вены кровь помещают в пробирке на водяную баню при температуре 37° С и каждые 30 с, наклоняя пробирку, смотрят, как смещается уровень жидкости. Прекращение смещения, т.е. свертывание крови, происходит в норме через 5—10 мин (способ Ли и Уайта). Широко применяются капельные способы определения свертываемости крови. Кровь либо набирают в капиллярную пипетку и определяют время, через которое кровь перестанет передвигаться в ней, либо помещают каплю крови во влажную подогреваемую камеру на парафинированное часовое стекло и определяют срок, когда капля при наклоне стекла перестает стекать к его краю.

4.Определение времени кровотечения: определяют по уколочной пробе по Дюке. Кончик пальца или мочку уха прокалывают скарификатором на глубину 3 мм. Самопроизольно выступающую кровь снимают каждые 30 с прикосновением бумаги. Нормальная продолжительность кровотечения 2-4 мин. Поскольку прекращение кровотечения связано с образованием белого (тромбоцитного) тромба, результаты пробы зависят от числа тромбоцитов и способности сосудистой стенки к сокращению, чему благоприятствует выделение тромбоцитами вазоконстриктора серотонина. При тромбоцитопении продолжительность кровотечения значительно удлиняется, число снятых капель возрастает во много раз. При нарушении тонуса капилляров размер капель становится больше.

ТромбоцитыЧисло их в норме 180,0— 320,0 •

109/л (180 000—320 000 в 1 мкл) крови.

При значительном снижении—тромбоцитопении — отмечается склонность к кровоточивости. Критической цифрой, приоторой наступает геморрагия, считают 30,0*109/л ). Тромбоцитопения

встречается при поражении костного мозга возбудителями инфекции, ионизирующей

радиацией, приеме некоторых лекарственных препаратов и при аутоиммунном процессе,

тромбоцитоз — после кровотечений, при полицитемии, злокачественных

новообразованиях.

Для определения числа тромбоцитов необходимо предотвратить их агглютинацию. Для этого на место укола пальца наносят каплю 14% раствора сульфата магния. Кровь, вытекая из ранки, сразу смешивается с

этим раствором. Из их смеси делают мазки, которые фиксируют и окрашивают по Романовскому—Гимзе

вдвое дольше, чем мазки крови. Пользуясь окошечком (как при подсчете рстикулоцитов), сосчитывают по полям зрения 1000 эритроцитов и все встретившиеся при этом тромбоциты. Затем, зная число эритроцитов в

I мкл, высчитывают число тромбоцитов в 1 мкл и в 1 л крови.

Кроме косвенного подсчета тромбоцитов, можно произвести и прямой в счетной камере, применив

разведение крови в смесителе специальными растворителями, например 1% раствором оксалата аммония.

Подсчет производят в фазово-контрастном микроскопе.