Взятие отпечатков из зева и носа для иммунофлюорес­центного исследования

Вирусологические методы выделения возбудителей трудоемки и малодоступны для широкого применения и используются для ретро­спективной диагностики заболевания. В клинической практике для ди­агностики острых вирусных инфекций более перспективным является использование метода прямой и непрямой иммунофлюоресценции, который позволяет довольно быстро диагностировать вирусное забо­левание в первые 2-3 дня болезни. Иммунофлюоресцентный метод ус­пешно применяется для обнаружения вирусов гриппа, парагриппа, аденовирусов, респираторно-синцитиальных вирусов, вирусов паро­тита, кори, простого герпеса, ЦМВ, ветряной оспы, краснухи.

Для исследования необходимо получить смывы из носоглотки, носа, конъюнктивы больного. Материал следует брать в первые 24-48 часов болезни. Смывы можно получить путем полоскания зева и про­мывания носа стерильным физиологическим раствором с последую­щим сбором этого раствора в стерильную посуду с добавлением анти­биотика (можно использовать флаконы из-под антибиотиков). Этот способ используют у детей старшего возраста. Больной сидит с не­сколько откинутой головой. В каждый носовой ход пипеткой вводят по 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия (больного предупреж­дают, чтобы он не глотал) и затем наклоняют голову вперед. Выте­кающий из носа и рта раствор собирают в чашку Петри. Смывную жидкость переносят в стерильную пробирку и центрифугируют в тече­ние 5 минут при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость собирают ка­пиллярной пипеткой, оставляя над осадком около 0,2 мл. Клеточный осадок ресуспендируют в оставшемся объеме жидкости. Каплю сус­пензии наносят на обезжиренное предметное стекло и делают мазок диаметром 1 см. Из каждой пробы готовят 4-5 мазков, которые высу­шивают при комнатной температуре.

У детей младшего возраста материал для исследования получают небольшим ватным тампоном на деревянной палочке, увлажненным физиологическим раствором. Тампон вводят в носовой ход на глубину 2-3 см и слегка прижимают всеми сторонами к слизистой оболочке нижней носовой раковины. Затем с тампона делают отпечатки на чис­том предметном стекле, обезжиренном эфиром. Границы отпечатков обводятся стеклографом. Отпечатки подсушивают и направляют в ла­бораторию.

Препараты-отпечатки готовят также на специальных пластинах из стекла и плексегласа. Пластинки должны иметь длину 7-8 см, ширину 0,5-0,6 см и толщину 0,2-0,25 см, закругленные и хорошо отшлифован­ные края. Перед употреблением пластины обезжиривают эфиром. Для получения отпечатка пластину вводят в нос на глубину 2-3 см, слегка прижимая к носовой перегородке, затем быстрым движением отводят в сторону. Границы отпечатка на пластине отмечают стеклографом.

Смывы из носоглотки, носа, конъюнктивы необходимо проводить натощак. Перед процедурой нос необходимо освободить от слизи. Ма­териал для иммунофлюоресцентного исследования следует содержать в условиях, при которых гарантируется сохранение антигенной актив­ности (температура не выше -20^оС). Взятый смыв транспортируют в вирусологическую лабораторию в термосах со льдом.

В описываемой методике используют антитела, меченные флуорес­центным красителем. Соединяясь с антигеном, они образуют комплекс, который при освещении ультрафиолетовыми лучами дает ярко-желтое свечение. При микроскопии препаратов обращают внимание на светя­щиеся вирусные частицы, располагающиеся внутри клеток в виде круглых или овальных мелких образований. В прямой методике взаи­модействие происходит между антигеном и специфическими антите­лами, предварительно обработанными флуоресцентными красителями. При непрямом методе вначале антиген связывается с обычным антите­лом, а затем этот комплекс обрабатывают меченным анти- глобулином, который соединяется с ним и обнаруживается в люминесцентном мик­роскопе.