Работа 4. Обнаружение редуцирующих ферментов при дыхании семян

ХОД РАБОТЫ

10 пророщенных семян гороха очищают от кожуры и разделяют на семядоли. Половину всех семян помещают в колбочку с водой и кипятят в течение 3 минут, считая после закипания, чтобы убить ферменты. Затем обе порции семядолей помещают в две пробирки с раствором метиленовой синьки и оставляют на несколько минут до посинения поверхности семядолей.

Семядоли отмывают водопроводной водой и заливают дистиллированной водой в пробирке так, чтобы слой воды был выше семян на 2 см, помещают на водяную баню с температурой 30-35°С.

Через несколько минут наблюдают полное исчезновение синей окраски у семядолей, не подвергавшихся кипячению вследствие превращения метиленовой синьки в бесцветное лейкосоединение.

В данном опыте метиленовая синька выступает в роли акцептора водорода.

структурная формула восстановленная

метиленовой сини метиленовая синь

(окрашенная, базоформа) (бесцветная, лейкоформа)

Подобный эксперимент можно проводить с зелеными частями высших растений, например, с элодеей, пеларгонией, колеусом и др.

Здесь четко прослеживается взаимосвязь восстановительной активности с возрастом растения.

В практической агрономии этот метод используется для определения жизнеспособности семян и отдельных органов растений, где об этом свидетельствует степень окрашенности (интенсивность) семян метиленовой синью (метод Нелюбова).

МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

1) спиртовка; 2) пробирки; 3) баня; 4) колбочки на 50 мл; 5) раствор метиленовой синьки; 6) семена гороха или фасоли.