ВЫДЕЛЕНИЕ САХАРАЗЫ ИЗ ДРОЖЖЕЙ

Сахараза из дрожжей имеет более правильное рабочее название β-фруктофуранозидаза (КФ 3.2.1.26), катализирует гидролиз β-гликозидных связей в молекулах как сахарозы, так и раффинозы. При этом сахароза расщепляется на глюкозу и фруктозу, а раффиноза – на фруктозу и мелибиозу.

ХОД РАБОТЫ. В фарфоровую ступку вносят 1 г прессованных пекарских дрожжей и тщательно растирают в 3 мл воды в течение 5 мин . Затем добавляют 17 мл воды, перемешивают и ставят ступку в термостат при 37 ˚С на 20 мин. Через каждые 5 мин содержимое перемешивают. По истечении указанного времени смесь переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 10 мин со скоростью 3,5 тыс об/мин. Надосадочную жидкость сливают в пробирку и используют как водный экстракт сахаразы.

РЕАКТИВЫ. Растворы с массовыми долями: 1% хлорида натрия и крахмала; размолотый солод; раствор Люголя (0,3 г кристаллического йода и 3 г йодида калия растворяют в 5 мл воды и после полного растворения йода объем доводят до 100 мл водой).

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ.

1. Химическая природа ферментов, их строение и структура.

2. Функция ферментов.

3. Сырье и источники для получения ферментов.

4. Источники и техника получения амилаз.

5. Биологическое сырье и техника выделения β-фруктофуранозидазы.

6. Основные этапы и условия выделения ферментов из биологического материала.

7. Характеристика чистого фермента и ферментного препарата.

8. Что такое субстрат, фермент, инкубация?

10. Как можно обнаружить фермент в экстракте биологического материала?