Методические указания. 1. Приготовление препаратов для микроскопического и серологического исследования.

1. Приготовление препаратов для микроскопического и серологического исследования.

Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки или чашки Петри бактериологической петлей или стерильной пипеткой.

В своей научной и практической деятельности микробиолог работает обычно с “чистыми” культурами микробов (рост микробов только одного определенного вида), добиваясь их получения из исследуемого материала, а затем поддерживая рост чистых культур в течение необходимого (иногда длительного) срока. При пересеве их с одной среды на другую или при из­влечении части культуры для приготовления мазка необходимо соблюдать условия, обеспечивающие предохранение чистой культуры от загрязнения посторонними микробами. Сохранение чистоты культуры является основой бактериологической рабо­ты, так как только при этом условии возможно точное выявле­ние всех свойств изучаемого микроба (морфологических, био­химических, серологических и др.).

Извлекают микробов из пробирки с помощью металли­ческой (предпочтительно платиновой) проволоки в ви­де петли или иглы . Последняя может быть погружена в пробирку только после стерилизации ее в пламе­ни спиртовки-фламбирования. При этом петля быстро накаливается и так же быстро осты­вает без повреждения металла. При прока­ливании петлю или иглу следует держать в пламени вертикально для того, чтобы проволока на всем протяжении была нака­лена докрасна. Затем, проведя несколько раз через пламя спиртовки, стерилизуют и ближайший к проволоке отрезок стеклянной или металли­ческой палочки, в которую вмонтирована петля.

Лишь после такой тщательной стерили­зации петля может быть внесена в пробирку с культурой микроорганизмов. Прикосновение к культуре слишком горячей петли может повредить микробам. Поэтому рекомендуется осту­дить петлю, предварительно прикоснувшись ею к внутренней поверхности пробирки или же к питательной среде, свободной от бакте­риального налета (если имеют дело с твер­дой средой); если проволока недостаточно остыла, то среда при прикосновении петли с треском расплавляется или “кипит”.

2.Забор биологического материала с поверхности питательной среды в бактериологичесой пробирке.

1. Для извлечения культуры с целью приго­товления мазка пробирку берут в левую руку между большим и указательным паль­цем в почти горизонтальном положении; при этом должна быть хорошо видна вся поверхность питательной среды с культурой бактерий.

2.Простерилизовав петлю, безымянным пальцем и ми­зинцем правой руки (остальные пальцы правой руки заняты петлей) вынимают из пробирки ватную пробку и так держат ее во время последующих манипуляций;

3. Вынув пробку, стери­лизуют края пробирки, обжигая их на пламени горелки,

4. Затем погружают петлю в пробирку, слегка касаясь внутренней поверхности стекла, для того, чтобы остудить петлю.

5.Остудив петлю, берут ею небольшое количество культуры (избыток культуры излишен) для приготовления мазка, стараясь не захватить при этом питательной среды;

6.Вынув петлю, опять обжигают край про­бирки, а также слегка обжигают и пробку,

7. Пробкой закрывают пробирку.

8.Не выпуская петли из рук, ставят про­бирку в штатив и приступают к приготовлению мазка .

3. Забор биологического материала с поверхности питательной среды в чашке Петри:

1. Для извлечения культуры с целью приго­товления мазка чашку Петри берут в левую руку в горизонтальном положении; большим и указательным паль­цами приоткрывают крышку чашки Петри, при этом должна быть хорошо видна вся поверхность питательной среды с культурой бактерий.

2.Простерилизовав петлю, вносят ее в чашку, слегка касаясь внутренней поверхности крышки чашки Петри, чтобы остудить петлю

3. .Остудив петлю, берут ею небольшое количество культуры для приготовления мазка, стараясь не захватить при этом питательной среды;

4.Вынув петлю, закрывают чашку и переворачивают ее вверх дном.

Контрольные вопросы

1. Какие методы иммунологических исследований Вам известны?

2.Что изучает клиническая иммунология?

3.Сформулируйте основные принципы организации иммунологических лабораторий?

4.Какие показатели периферической крови определяют в иммунологических лабораториях?

5. Что такое инбредные животные?

6. Почему в качестве инбредных животных в основном используют лабораторных мышей?

Список литературы:

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема № 2: ИММУНИТЕТ: ВИДЫ ИММУНИТЕТА, НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ.

Цель: изучить строение иммунной системы организма человека, строение и функции иммунокомпетентных клеток, изучить виды иммунитета и неспецифические факторы защиты организма. Познакомиться с основными этапами филогенеза и онтогенеза иммунной системы

Вопросы для самоподготовки:

1. Виды невосприимчивости макроорганизма к возбудителям инфекционных заболеваний (врожденная и приобретенная невосприимчивость, видовая невосприимчивость, естественная резистентность, иммунитет: естественный и искусственный, активный и пассивный).

2. Видовая невосприимчивость к возбудителям инфекционных болезней и ее механизмы.

3. Физиологические (барьерная функция покровов, антимикробное действие секретов, вы­ведение микробов физиологическими путями, антагонистическое действие нормальной микрофлоры, барьерная и адсорбционная функция тканей, действие тканевых ингибито­ров, фагоцитоз, антимикробное действие лизоцима, комплемента, интерфероны и др.) механизмы неспецифической резистентности

4. Механизм фагоцитоза. Макро- и микрофаги, их функциональные отличия. Завершен­ный и незавершенный фагоцитоз.

5. Комплемент. Пути активации.

6. Патофизиологи­ческие (стресс, воспалительная реакция) механизмы неспецифической резистентности

8. Иммунная система организма. Центральные и периферические органы иммунной системы.

9. Филогенез и онтогенез иммунной системы.

10. Иммунокомпетентные клетки. Клеточные и гуморальные механизмы иммунитета (Т и В системы).

.

План:

Программа:

1. Иммунитет, виды и формы иммунитета.

2. Неспецифические факторы защиты.

3. Фагоцитоз.

4. Система комплемента.

5. Воспалительная реакция.

6. Интерфероны.

7. Иммунная система организма

8.Филогенез и онтогенез иммунной системы

9. Иммунокомпетентные клетки

Демонстрация:

1. Схемы и таблицы с механизмами неспецифического иммунитета.

2. Микропрепарат незавершенного фагоцитоза гонококков.

Задание студентам:

1. Зарисовать схемы механизмов активации комплемента.

2. Зарисовать схему действия интерферонов.

3.ПоставитьОпыт действия лизоцима на различные виды микробов

4.Изучить микропрепарат незавершенного фагоцитоза гонококков. Зарисовать.

5.Заполнить таблицу:Особенности строения и функций иммунокомпетентных клеток

6.Заполнить таблицу:Эволюция иммунной системы

Информационный материал:

Иммунитет (от лат. immunitas — неприкосновенный, находящийся под защитой, освобождение, избавление от болезни) — это система биологической защиты внутренней среды многоклеточного организма (гомеостаза) от генетически чужеродных веществ экзогенной и эндогенной природы.

Факторы неспецифической резистентности:

• ареактивность клеток макроорганизма к патогенным микроорганизмам и токсинам, обусловленную генотипом и связанную с отсутствием на поверхности таких клеток рецепторов для адгезии патогенного агента;

• барьерная функция кожи и слизистых оболочек, которая обеспечивается отторжением клеток эпителия кожи и активными движениями ресничек мерцательного эпителия слизистых оболочек. Кроме того, она обусловлена выделением экзосекретов потовых и сальных желез кожи, специфических ингибиторов, лизоцима, кислой средой желудочного содержимого и другими агентами. Биологические факторы защиты на этом уровне обусловлены губительным воздействием нормальной микрофлоры кожи и слизистых покровов на патогенные микроорганизмы;

• температурная реакция, при которой прекращается размножение большинства патогенных бактерий.

• клеточные и гуморальные факторы организма.

В случае проникновения патогенов в организм включаются гуморальные факторы, к которым относятся белки системы комплемента, пропердин, лизины, фибронектин, система цитокинов (интерлейкины, интерфероны и др.). Развиваются сосудистые реакции в виде быстрого локального отека в очаге повреждения, что задерживает микроорганизмы и не пропускает их во внутреннюю среду. В крови появляются белки острой фазы — С-реактивный протеин и маннансвязывающий лектин, которые обладают способностью взаимодействовать с бактериями и другими возбудителями. В этом случае усиливаются их захват и поглощение фагоцитирующими клетками, т. е. происходит опсонизация патогенов, а эти гуморальные факторы играют роль опсонинов.

К клеточным факторам неспецифической защиты относятся тучные клетки, лейкоциты, макрофаги, естественные (натуральные) киллерные клетки (NK-клетки, от англ. «natural killer»).