Алгоритм определения уровня СА 125

1. Поместить в рамку необходимое количество стрипов — исследуемые образцы в двух повторах и 14 лунок для калибровочных проб и контрольной сыворотки.

2. Если предполагаемая концентрация антигена СА 125 в исследуемом образце превышает 400 Ед/мл, его следует развести, используя реагент С1 (калибровочная проба 0 Ед/мл).

3. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 50 мкл каждой калибровочной пробы и контрольной сыворотки. В остальные лунки в дубликатах по 50 мкл исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови. Внесение калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых образцов необходимо произвести в течение 5-10 минут.

4. Внести во все лунки по 50 мкл раствора конъюгата.

5. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности, заклеить планшет бумагой для заклеивания планшета и инкубировать 5-10 минут.

6. Удалить содержимое лунок аспирацией (например, с помощью водоструйного насоса) или декантированием и отмыть лунки 5 раз. При каждой отмывке добавить во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора, встряхнуть планшет круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией. Задержка при отмывке не требуется. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием планшента в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.

7. Внести по все лунки по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина (ТМБ). Внесение необходимо произвести в течение 2-3 минут. Инкубировать в темноте при комнатной температуре в течение 10-20 минут в зависимости от степени развития синего окрашивания.

8. Внессти во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента. При этом содержимое лунок окрасится в ярко-желтый цвет.

9. Измерить величину оптической плотности в лунках планшета на фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение необходимо произвести в течение 15 минут после внесения стоп-реагента.

10. В линейных координатах построить калибровочный график: ось абсцисс (х) — концентрация антигена СА 125 в калибровочных пробах (Ед/мл), ось ординат (у) — оптическая плотность калибровочных проб.

11. По графику определить содержание антигена СА 125 в исследуемых образцах. Если исследуемых образец предразводили, умножить полученный результат на величину разведения.

Реферерентные значения:

Мужчины < 35

Женщины < 35

1-й триместр < 60

2-й триместр < 150

3-й триместр < 200

В период лактации < 80