Правила работы с дозаторами

Температура дозируемой жидкости и дозатора должна быть одинаковой

Прямое дозирование:

1. Установить требуемый объем жидкости с помощью операционной кнопки (нельзя устанавливать значение объема за пределы диапазона дозатора)
2. Надеть наконечник и смочить его перед дозированием 3-5 раз жидкостью, которую будут отбирать.
3. Нажать большим пальцем на операционную кнопку до первой остановки.
4. Опустить наконечник дозатора в раствор на глубину 2-3 мл и медленно освободить кнопку (во время набора жидкости дозатор держать вертикально)
5. Вытолкнуть раствор из наконечника дозатора в пробирку путем нажатия операционной кнопки до упора большим пальцем (дозируя жидкость, нужно касаться наконечником стенки пробирки, не допуская разбрызгивая и вспенивая дозируемую жидкость)
6. Снять наконечник нажатием большого пальца на удалитель наконечника
7. По окончанию работы дозатор установить в штатив

Непрямое дозирование:

1. Установить требуемый объем жидкости с помощью операционной кнопки (нельзя устанавливать значение объема за пределы диапазона дозатора)
2. Надеть наконечник и смочить его перед дозированием 3-5 раз жидкостью, которую будут отбирать.
3. Нажать большим пальцем на операционную кнопку до упора.
4. Опустить наконечник дозатора в раствор на глубину 2-3 мл и медленно освободить кнопку (во время набора жидкости дозатор держать вертикально)
5. Вытолкнуть раствор из наконечника дозатора в пробирку путем нажатия операционной кнопки до первой остановки большим пальцем (дозируя жидкость, нужно касаться наконечником стенки пробирки, не допуская разбрызгивая и вспенивая дозируемую жидкость)
6. Снять наконечник нажатием большого пальца на удалитель наконечника
7. По окончанию работы дозатор установить в штатив

Объем:

1 литр = 1000 мл

1 мл = 1000 мкл

Концентрация:

1 моль = 1000 ммоль

1 ммоль = 1000 мкмоль

Качественные реакции на белок (цветные)

Эти реакции применяются для распознавания белковых веществ и определения их аминокислотного состава в различных биологических жидкостях, а именно:

1. Определение количества белка в плазме крови
2. Определение аминокислот в крови и моче
3. Для выявления наследственных или приобретенных нарушений обмена веществ у новорожденных

К цветным реакциям относятся:

1. Биуретовая реакция. Это качественная реакция на пептидную связь. Эта реакция является универсальной для всех белков, так как она открывает наличие не менее 2-х пептидных связей в белке. В основе биуретовой реакции лежит способность пептидных связей в щелочной среде образовывать с сульфатом меди CuSO₄ окрашенное комплексное соединение, цвет которого зависит от длины полипептидной цепи. Раствор белка (нативного) дает сине-фиолетового окрашивания.
2. Ксантопротеиновая реакция. Это качественная реакция на циклические аминокислоты, содержащиеся в белке. При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты HNO₃ и нагревании появляется желтое окрашивание, которое в присутствии щелочи переходит в оранжевое. Сущность этой реакции состоит в том, что при наличии циклических аминокислот в белке появляется желтое окрашивание за счет нитрованного бензольного кольца с образованием нитросоединений, выпадающих в осадок.
3. Реакция Фоля. Эта качественная реакция на серосодержащие аминокислоты в белке (цистеин, цистин, метионин). Сущность этой реакции состоит в том, что аминокислоты содержащие сульфгидрильные группы -SH, подвергаются щелочному гидролизу с образованием сульфида натрия Na2S, который с солями свинца образуют осадок сульфида свинца PbS черного или бурого цвета. Эта реакция протекает в два этапа: на первом этапе происходит отщепление SH-группы аминокислоты и переход серы из органического соединения в неорганическое; на втором этапе качественное обнаружение ионов серы в растворе.
4. Нингидриновая реакция. Эта реакция характерна для аминогрупп -NH₂ в альфа-положении и обусловлена наличием альфа-аминокислоты в молекуле белка. При нагревании белка с водным раствором нингидрина происходит распад аминокислот на углекислый газ и аммиак, соответствующий аминокислоте альдегид и восстановленный нингидрин, который затем конденсируется со своей окислонной формой и аммиаком с образование окрашенного продукта, т. е. с образованием продута конденсаци нингидрина с аминокислотой фиолетово-синего или красно-фиолетового цвета. Этот продукт называется дикетогидриндилидена-дикетогидриндамина (ДИДА). Эту реакцию широко используют в биохимической лаборатории для количественного определения аминокислоты в биологических жидкостях (кровь, моча, спинномозговая жидкость и др.), а также для количественного определения белков и пептидов.

Лабораторная работа «Химия белков»

Цель: изучение состава белков. Цветные реакции на обнаружение белков и аминокислот

Исследуемый материал: яичный белок 1% раствор

Приготовление исследуемого материала: белок куриного яйца фильтруют через марлю и затем разводят дистиллированной водой в соотношении 1:10

Оборудование: водяная баня, термостат

Лабораторная посуда: штатив с пробирками, капельницы.

Опыт №1. Биуретовая реакция на пептидную связь.

Принцип реакции: в основе реакции лежит способность пептидных связей в щелочной среде образовывать с сульфатом меди комплексное соединение сине-фиолетового цвета.

Реактивы: 1% раствор сульфата меди, 10% раствор гидроксида натрия

Ход работы: В пробирку внести пять капель раствора яичного белка, затем добавить 1 каплю раствора сульфата меди, 3 капли (избыток) раствора гидроксида натрия и перемешать. Содержимое пробирки приобретет сине-фиолетовое окрашивание

Задание: Представить проделанный опыт в виде рисунка и сделать вывод.

Опыт №2. Ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты

Принцип реакции: нитрирование бензольного кольца циклических аминокислот в белке азотной кислотой при нагревании с образованием нитросоединений, которое выпадает в осадок желтого цвета.

Реактивы: разбавленная азотная кислота

Ход работы: в пробирку внести пять капель раствора яичного белка, затем добавить три капли азотной кислоты и нагреть на водяной бане. Появится осадок желтого цвета.

Задание: Представьте проведенный опыт в виде рисунка и сделайте вывод. Напишите уравнение реакции нитрования тирозина.

Опыт №3. Реакция Фоля на серосодержащие аминокислоты

Принцип реакции: аминокислоты содержащие сульфгидрильные группы -SH, подвергаются щелочному гидролизу при нагревании с образованием сульфида натрия Na₂S, который с солями свинца образуют осадок сульфида свинца PbS черного или бурого цвета.

Реактивы: 5% раствор ацетата свинца, 30% раствор гидроксида натрия

Ход работы: В пробирку внести пять капель раствора яичного белка, добавить 1 каплю раствора ацетата свинца, 5 капель раствора гидроксида натрия и нагреть на водяной бане. После интенсивного кипячения появляется черный или бурый осадок.

Задание: Представьте проделанный опыт в виде рисунка и сделайте вывод. Напишите уравнения протекающих реакция на цистеин.

Лабораторная работа. Тема «Химия белков»

Цель: Изучение свойств белков. Реакции осаждения

Белки в растворе сохраняются в нативном (природном) состоянии за счет факторов устойчивости, а именно: заряда белковой молекулы и наличия гидратной (водной) оболочки вокруг ее. В основе реакций осаждения лежит снятие заряда с белковой молекулы и удаление водной оболочки вокруг ее.

Опыт №1. Обратное осаждение белков «высаливание»

Принцип метода. Обратимое осаждение белков состоит в том, что при удалении факторов осаждения, белки, выпавшие в осадок вновь растворяются в воде и приобретают свои нативные свойства, что подтверждает биуретовая реакция.

Высаливание проводят с помощью нейтральных растворов концентрированных солей щелочных и щелочно-земельных металлов. Выпадение различных белков в осадок зависит от молекулярной массы и величины их молекул, от их заряда.

При высаливании в первую очередь в осадок выпадают крупные и плотные молекулы белка (глобулины) при меньшей концентрации солей, а альбумины высаливаются более концентрированными растворами солей.

Исследуемый материал: неразведенный яичный белок.

Реактивы: насыщенный раствор хлорида натрия, порошок хлорида натрия, 1% раствор сульфата меди, 10% раствор гидроксида натрия.

Ход работы: в пробирку налить 30 капель неразведенного яичного белка и добавить 30 капель насыщенного раствора хлорида натрия. Образуется осадок. Через 5 минут отфильтровать осадок. Стеклянной палочкой снять осадок с фильтра в пробирку, растворить его, добавив пять капель дистиллированной воды, и провести биуретовую реакцию. В пробирку с фильтратом добавить порошок хлорида натрия до полного насыщения раствора, то есть до тех пор пока не прекратится растворение соли. Образуется осадок. Осадок отфильтровать, снять с фильтра, растворить в воде и провести с ним биуретовую реакцию.

Задание:

1. Как называется обратимое осаждение белков?

2. Укажите какие белки выпадают в осадок в первую очередь?

3. Что произошло с яичным белком в процессе высаливания?

4. Какая реакция доказывает, что белок не потерял свои нативные свойства при высаливании, как эта реакция проводится и что она определяет в белке?

5. Растворы солей каких металлов используют при высаливании?

6. За счет каких факторов устойчивости белки сохраняются в нативном состоянии?

Опыт №2 «Необратимое осаждение при кипячении»

Принцип метода. Необратимое осаждение белков состоит в том, что при удалении факторов осаждения белки теряют свои нативные свойства в связи с глубоким нарушением структуры белков (вторичной и третичной), то есть происходит денатурация белков.

Наиболее полное и быстрое осаждение наблюдается в изоэлектрической точке, то есть при значении pH среды, когда суммарный заряд белковой молекулы равен нулю.

При нагревании белка свыше 50-60º наступает тепловая денатурация, которая заключается в развертывании полипептидной цепи и разрушении гидратной оболочки. При этом раствор белка мутнеет.

Куриный белок обладает кислыми свойствами, имеет отрицательный заряд и осаждается в слабокислой среде (изоэлектрическая точка его равна pH 4,8).

В сильнокислой и сильнощелочной среде денатурированный белок в осадок не выпадает, так как в сильнокислой среде белок приобретает положительный заряд, а в сильнощелочной среде отрицательный заряд белка увеличивается.

Исследуемый материал: 1% раствор яичного белка

Оборудование: водяная баня, штатив с пробирками, капельницы.

Реактивы: 10% раствор гидроксида натрия, 1% и 10% растворы уксусной кислоты

Ход работы: В штативе установить четыре пробирки, пронумеровать и прилить в каждую пробирку по 10 капель 1% раствора яичного белка. Затем на водяной бане: первую пробирку нагреть до кипения, во вторую пробирку добавить одну каплю 1% раствора уксусной кислоты и нагреть до кипения, в третью пробирку добавить одну каплю 10% раствора уксусной кислоты и нагреть до кипения, в четвертую пробирку добавить одну каплю 10% раствора гидроксида натрия и нагреть до кипения. Проанализировать содержимое всех пробирок после их нагревания. (первая и вторая пробирки — белок свернулся, в третьей и четвертой — нет.)

Задание: Укажите в какой пробирке белок выпал в осадок, а в каких пробирках осаждение белка не наблюдалось. Объясните и сделайте вывод.

Опыт №3. Необратимое осаждение белков солями тяжелых металлов

Принцип метода: Белки при взаимодействии с солями свинца, меди, ртути, серебра денатурируются и выпадают в осадок. В основе этого процесса лежит адсорбция металла на поверхности белковой молекулы с образованием нерастворимого комплекса.

При избытке некоторых солей (сульфата меди), наблюдается растворение образовавшегося осадка. Это объясняется тем, что на поверхности денатурированного белка происходит накопление ионов металла и появление положительного заряда на белковой молекуле. При избытке солей серебра, ртути растворение белка не происходит.

Исследуемый материал: 1% раствор яичного белка

Реактивы: 10% раствор сульфата меди, 5% раствор ацетата свинца, 5% раствор нитрата серебра.

Ход работы: в штативе установить три пробирки, пронумеровать и прилить в каждую пробирку по пять капель 1% раствора яичного белка. Затем в первую пробирку добавить 1 каплю раствора сульфата меди, во вторую пробирку 1 каплю раствора ацетата свинца, в третью 1 каплю раствора нитрата серебра.

Наблюдайте за выпадением осадка в пробирках. Затем к образовавшимся осадкам добавить: в первую пробирку 10 капель сульфата меди, во вторую пробирку 10 капель раствора ацетата свинца, в третью пробирку 10 капель раствора нитрата серебра. Наблюдайте, в каких пробирках происходит растворение осадка (растворяется только в первой).

Задание: Укажите при действии избытка каких солей металла происходит растворение осадка. Объясните и сделайте вывод.