Лабораторная работа №10. Биотестирование вод на токсичность по гибели ракообразных Daphnia magna Straus

Определение острой токсичности сточных, поверхностных и подземных вод, донных отложений (водных вытяжек), буровых растворов, водных растворов отдельных веществ и их смесей можно проводить по гибели ракообразных Daphnia magna Straus

Методика основана на установлении различия между количеством погибших дафний в анализируемой пробе (опыт) и культивационной воде (контроль).

Критерием острой летальной токсичности является гибель 50% дафний и более в опыте по сравнению с контролем за 96 ч биотестирования.

Материалы и реактивы: лупа складная; воронки разные лабораторные; колбы мерные, вместимостью 0,5 и 1,0 дм³; бумага фильтровальная; вата и марля для изготовления ватно-марлевых пробок; пипетки мерные вместимостью от 1 до 10 см³; посуда стеклянная: вместимостью 2 дм³ для культивирования дафний; вместимостью от 100 до 150 см³ для биотестирования; трубки стеклянные внутренним диаметром 5-7 мм для отлова дафний; цилиндры мерные вместимостью 0,1; 0,5 и 1,0 дм³; дрожжи хлебопекарные; культура зеленых водорослей (для корма - родов Chlorella или Scenedesmus);

Биотестирование проводят в помещении, где не хранят и не работают с летучими веществами, не используют обработку помещения инсектицидами.

Объем пробы воды (водной вытяжки), бурового раствора, раствора вещества (смеси веществ) для определения острой летальной токсичности должен быть не менее 1 дм³.

Температура анализируемой пробы при биотестировании должна быть (20±2)°С, концентрация кислорода в пробе в начале биотестирования - не менее 6 мг/дм³. Если его концентрация ниже 6 мг/дм³, пробу аэрируют микрокомпрессором. Воздух должен подаваться равномерно до достижения концентрации кислорода 6 мг/дм³. Во время биотестирования пробу не аэрируют.

Битестирование проводят при рассеянном свете. Не допускается попадание прямых солнечных лучей на тест-объект. Длительность светового периода соответствует естественному.

Плотность посадки односуточных дафний в опыте и контроле должна составлять 10 экземпляров на 100 см³. Повторность трехкратная.

Результаты учитывают, если в конце биотестирования концентрация кислорода в анализируемых пробах была не менее 2 мг/дм³, температура воды составляла (20±2)°С, количество погибших дафний в контроле не превышало 10%.

В качестве тест-объекта используют лабораторную культуру дафний - Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea).

Культуру дафний выращивают в стеклянной посуде вместимостью до 2 дм³. Посуду моют питьевой содой и тщательно ополаскивают дистиллированной водой. Нельзя применять синтетические моющие средства и органические растворители.

Для культивирования дафний используют питьевую воду. Пересаживают дафний при помощи стеклянной трубки внутренним диаметром 5-7 мм так, чтобы их не травмировать. Для этого конец трубки помещают под поверхность воды и держат до тех пор, пока дафнии не перейдут в трубку. Аэрировать воду в посуде с дафниями не рекомендуется.

Дафний кормят один раз в сутки суспензией зеленых водорослей и один раз в неделю - суспензией хлебопекарных дрожжей.

В качестве водорослевого корма для дафний рекомендуется использовать зеленые протококковые водоросли - сценедесмус или хлореллу.

Для биотестирования используют дафний в возрасте до 24 ч, которых кормят за 2-3 ч до начала биотестирования. Чтобы получить необходимое количество тест-объектов для биотестирования, 20-30 самок дафний с выводковыми камерами, полными яиц или зародышей, за одни сутки до биотестирования пересаживают в стеклянную посуду емкостью от 0,5 до 1,0 дм³ с водой для культивирования и вносят корм. После появления молоди (каждая самка может выметать от 10 до 40 молодых дафний) взрослых особей удаляют.

Задание. Пробу воды соответствующего разбавления наливают в стеклянные сосуды по 100 см³ (опыт). Другие сосуды наполняют таким же объемом отфильтрованной воды из емкостей, где культивируются дафнии (контроль). Повторность в опыте и контроле трехкратная.

В каждый опытный и контрольный сосуд помещают по 10 дафний в возрасте до 24 ч. Их быстро переносят стеклянной трубкой диаметром 5-7 мм, погрузив ее в воду. Продолжительность биотестирования составляет 96 ч. Во время биотестирования дафний не кормят.

В конце биотестирования визуально подсчитывают количество живых дафний. Живыми считают дафний, которые свободно передвигаются в толще воды или всплывают со дна сосуда не позже, чем через 15 сек после его легкого встряхивания. Остальных дафний считают погибшими.

На основании результатов трех параллельных определений количества живых дафний в контроле и опыте находят средние арифметические количества живых дафний в контроле (опыте).

Рассчитывают в процентах количество погибших дафний в опыте по отношению к контролю.

Вывод о наличии или отсутствии острой летальной токсичности пробы воды (водной вытяжки), бурового раствора или раствора вещества (смеси веществ) делают на основании величины А (процента гибели дафний в опыте по отношению к контролю). Если величина А составляет 50% дафний и более, считают, что анализируемая проба проявляет острую летальную токсичность.