Гиосциамин

По данной методике определяется содержание суммы алкалои­дов. Определение проводится титрометрическим методом (обратное титрование).

10 г измельченного сырья, проходящего сквозь сито с диамет­ром отверстий 1 мм, помещают в колбу вместимостью 250 мл, при­ливают 7 мл концентрированного раствора аммиака, 150 мл этило­вого эфира [3] и в течение I ч смесь часто и энергично взбалтывают, эфирное извлечение быстро фильтруют через вату в колбу вмести­мостью 200 мл, прикрывая воронку часовым стеклом. К фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично взбалтывают и оставляют в покое до просветления эфирного слоя, после чего отмеривают с помощью мерного цилиндра 90 мл эфирного извлечения в делительную во­ронку вместимостью 200 мл. Цилиндр дважды ополаскивают этило­вым эфиром порциями по 10 мл, которые присоединяют к отмерен­ному эфирному извлечению.

Из эфирного извлечения алкалоиды извлекают последовательно 20, 15, 10 мл 1%-ной НС1 до полного их извлечения (проба с ре­активом Майера или раствором кремневольфрамовой кислоты), каждый раз фильтруя через смоченный водой фильтр (диаметром 5 см) во вторую делительную воронку такой же вместимости. Фильтр дважды промывают 1%-ной НС1 по 5 мл, присоединяя промывную, жидкость к общему кислотному извлечению.

Кислотное извлечение подщелачивают 10%-ным раствором ам­миака до щелочной реакции по фенолфталеину и алкалоиды извле­кают последовательно 20, 15, 10 мл хлороформа, взбалтывая по 3 мин.

Каждую порцию хлороформного извлечения фильтруют через бумажный фильтр, на который предварительно помещают 4—5 р свежепрокаленного безводного сульфата натрия, смоченного хлоро­формом. Фильтрование проводят в колбу для отгонки вместимостью 100 мл. Фильтр промывают хлороформом дважды по 5 мл. Хлоро­форм отгоняют на водяной бане до 1—2 мл, остаток хлороформа в колбе удаляют продуванием воздуха до полного исчезновения запаха растворителя.

Сухой остаток растворяют в 15 мл 0;02 н. НС1 при подогревании на водяной бане'и оттитровывают избыток последней 0,02 н. NaOH до появления желтой окраски (индикатор — метиловый красный).

1 мл 0,02 н. НС1 соответствует 0,005780 г алкалоидов (считая на гиосциамин). Процентное содержание в пересчете на абсолютно сухое сырье х вычисляют по формуле

(15 — V) 0,005780- 100- 100 /л (100—да)

где V — объем 0,02 н. NaOH, пошедшего на титрование, мл; т — масса навески сырья, соответствующая объему эфирного извлече­ния, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %.

"Реактивы и оборудование: аммиак(конц., 10%-ный р-р); НС1 (1%-ная, 0,02 н.); NaOH (0,02 н.); хлороформ; эфир этиловый; Na₂S0₄ (безводн.); реактив Майера; кремневольфрамовая кислота; фенолфталеин; метиловый крас­ный;

Бумага лакмусовая синяя; бумага фильтровальная; вата гигроскопическая; колбы с притертой пробкой вместимостью 150 мл; колбы конические с нормаль­ным шлифом вместимостью 100 мл; колбы конические вместимостью 100 мл; во­ронки делительные вместимостью 200 мл; цилиндры мерные на 10, 20 и 100 мл; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; сггекла часовые; палочки стеклянные; бюксы с притертой крышкой; бюретки вместимостью 25 мл; капель­ницы стеклянные лабораторные; установка для отгонки хлороформа; шкаф су­шильный лабораторный; весы ручные; весы лабораторные аналитические; экси­катор; штативы для делительных воронок; штативы лабораторные; бани водя­ные лабораторные; сито с диаметром отверстий 1 мм.

Методика количественного определения скополамина в семенах дурмана индейского (Semen Daturae innoxicte) (ФС 42-1005-75). Плоды и семена дурмана индейского (Datura innoxia Mill.) сем. па­сленовых (Solanaceae) содержат тропановые алкалоиды (скопола- мин, гиосциамин, норгиосциамин и др.). Большее количество при­ходится на долю скополамина.

Определение содержания скополамина в растительном сырье проводится гравиметрическим методом.

10(5 г сырья, измельченного и просеянного сквозь сито с отвер­стиями диаметром 1 мм, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 1 л, заливают 800 мл ди­хлорэтана и 50 мл раствора аммиака, встряхивают в течение 20 мин и оставляют до следующего дня. Затем содержимое колбы вновь взбалтывают в течение 20 мин и после отстаивания дихлорэтановое извлечение фильтруют, точно измеряют его объем, переносят в де­лительную воронку вместимостью 1 л, алкалоиды извлекают 10%-ной уксусной кислотой 6 раз по 20 мл до полного извлечения (проба с кремневольфрамовой кислотой).

Полученное уксуснокислое извлечение промывают 2—3 раза хлороформом порциями по* 20 мл, затем уксуснокислое извлечение подщелачивают карбонатом калия по фенолфталеиновой бумаге и алкалоиды извлекают этиловым эфиром 5—6 раз порциями по 30 мл (проба с кремневольфрамовой кислотой). Эфирные извлечения фильтруют через бумажный фильтр с 3—4 г безводного Na₂S0₄ в предварительно взвешенную (с погрешностью не более 0,0001 г) круглодонную колбу вместимостью 200 мл, фильтр с Na₂S0₄ про­мывают 30 мл сухого этилового эфира, который присоединяют к основному эфирному извлечению, эфир отгоняют досуха на водя­
ной бане. Остаток растворяют в 15—20 мл хлороформа, приливают 20—25 мл 1%-ной пикриновой кислоты в хлороформе, 2—3 мл воды и 20 мл бензола. Содержимое колбы перемешивают стеклян­ной палочкой в течение 45 мин и оставляют на 24 ч.

Выпавший осадок пикрата скополамина отфильтровывают на предварительно взвешенном стеклянном фильтре № 3. Фильтр с осадком и колбу с пикратом скополамина, оставшимся на стенках, сушат в сушильном шкафу при 100—105 °С в течение 3 ч до постоян­ной массы и после охлаждения взвешивают. Масса пикрата скопола­мина, находящегося в колбе и собранного на стеклянном фильтре, составляет общее количество выделенного пикраТгГ скополамина. 1 г пикрата скополамина содержит 0,559 г скополамина-основания.

Процентное содержание скополамина-основания х на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле

_ 0,559а100 • 100* m (100 —йу) '

где т — масса навески сырья, соответствующая объему дихлорэта- нового извлечения, взятого для анализа, г; а — количество пи­крата скополамина, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %; 0,559 — коэффициент пересчета пикрата скополамина на ско- пол амин-основание.

Реактивы и оборудование: аммиак 10%-ный; СН₃СООН 10%-ная; K₂C0₃; Na₂S0₄; пикриновая кислота; кремневольфрамовая кислота; дихлорэтан; этиловый эфир; бензол; хлороформ; фенолфталеин

Бумага .фильтровальная; колбы с притертой пробкой вместимостью 1 л; колбы конические вместимостью 1 л; колбы круглодонные с нормальным шли­фом вместимостью 200 мл; цилиндры мерные на 10, 100 и 1000 мл; фильтры стек­лянные № 3, воронки делительные вместимостью 200 и 1000 мл, воронки стеклян­ные для фильтрования диаметром 7 см; бюксы с притертыми крышками; эксика­тор; палочки стеклянные; сито с диаметром отверстий 1 мм; установка .для от­гонки эфира; бани водяные лабораторные; весы ручные; весы лабораторные ана­литические; штативы для делительных воронок; шкаф сушильный лабораторный.

Методика количественного определения алкалоидов в траве тер­мопсиса (Herba Thermopsidis) (ГФ X, ст. 327). В траве термопсиса (Thermopsis lanceolata R. Br.) сем. бобовых — Fabaceae (Legumino- sae) содержатся алкалоиды — производные хинолизидина (термоп­син, гомотермопсин, пахикарпин, анагирин, метилцитизин и др.):

пахикарпин анагирин (термопсин) метилцитизив

По данной методике определяется сумма алкалоидов титромет- рическим методом (прямое титрование).

Около 10 г (точная навеска) травы термопсиса, измельченной и просеянной сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают в колбу вместимостью 400—500 мл, приливают 200 мл хлороформа, подщелачивают 10%-ным раствором аммиака до ясно щелочной реакции по фенолфталеину, взбалтывают на вибрационном аппарате в течение 1,5 ч-. Хлороформное извлечение процеживают через вату в мерный цилиндр. Точно отмеренный объем хлороформного извлече­ния, соответствующий определенной навеске сырья, переносят в колбу и хлороформ отгоняют до объема 5 мл. Остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, колбу дважды промы­вают 5 мл хлороформа, который присоединяют к основному хлоро­формному раствору. Хлороформный раствор взбалтывают с 1 %-ной НС1 по 10 мл, затем по 5 мл до полного извлечения алкалоидов (проба с реактивом Майера или с раствором кремневольфрамовой кислоты). Объединенные солянокислые извлечения подщелачивают 10%-ным NaOH по фенолфталеину и трижды извлекают хлорофор­мом порциями по 15, 10 и 5 мл. Хлороформные извлечения фильт­руют через фильтр, в который помещают 2 г безводного Na₂S0₄. Фильтр с Na₂S0₄ трижды промывают хлороформом порциями по 10 мл, которые присоединяют к основному фильтрату. Хлороформ отгоняют на водяной бане до 2—3 мл и его остаток удаляют проду­ванием воздуха. Полученный в колбе остаток растворяют в 5 мл этилового спирта и прибавляют 15 мл воды, 2 капли раствора ме­тилового красного и 1 каплю метиленового синего и титруют 0,1 н. НС1 до появления сине-фиолетового окрашивания.

1 мл 0,1 н. НС1 соответствует 0,0244 г алкалоидов термопсиса: _ 0,0244У-100-100-200 * V\tn (100 —ш)

где V — объем 0,1 н. НС1, израсходованный на титрование, мл; m — масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья при высу­шивании, %; V₁ — объем хлороформного извлечения, взятого для анализа, мл.

Реактивы и оборудование: NH₄OH 10%-ный; хлороформ; этиловый спирт (этанол); НС1, 0,1 н., 1%-ная; NaOH; фенолфталеин; Na₂S0₄ (безводн.); этиленовый синий; метиловый красный; реактив Майера; креМне- вольфрамовая кислота.

Колбы с притертой пробкой вместимостью 500 мл; колбы конические с нор­мальным шлифом вместимостью 100 мл; колбы конические вместимостью 100 мл; воронки делительные вместимостью 100 мл; цилиндры мерные на 10, 25 и 200 мл; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; бюретки вместимостью 25 мл; капельницы стеклянные лабораторные; установка для отгонки хлороформа; бюксы с притертой крышкой; штативы для делительных воронок; штативы лабора­торные; шкаф сушильный лабораторный; эксикатор; весы аналитические лабора­торные; весы ручные; сито с диаметром отверстий 1 мм.

Методика количественного определения цитизина в траве тер­мопсиса очередноцветкового (Herba Thermopsidis alterniflorae ФС 42-1281-79). Трава термопсиса очередноцветкового (Thermopsis alterniflora Rgl. et Schmath.), сем. бобовых — Fabaceae (Legumino- sae) содержит алкалоиды производные хинолизидина; основным является цитизин:

Трава термопсиса очередноцсеткового наряду с семенами тер­мопсиса ланцетовидного служит промышленным источником полу­чения цитизина. Определение содержания цитизина в траве термоп­сиса очередноцветкового проводят хроматоспектрофотометрическим методом.

Около 10 г (с погрешностью до 0,01 г) сырья, измельченного и просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, приливают 100 мл хло­роформа, подщелачивают 5 мл концентрированного раствора NH₄OH, закрывают пробкой и встряхивают на вибрационном аппа­рате в течение 2 ч или оставляют при комнатной температуре на 12—15 ч, после чего встряхивают полчаса.

Хлороформное извлечение фильтруют через вату в мерный ци­линдр; 50 мл фильтрата переносят в коническую колбу вместимо­стью 100 мл и хлороформ отгоняют до объема 1—2 мл. Остатки хлороформа удаляют продуванием воздуха. К остатку пипеткой при­ливают 2 мл 0,1 н. раствора NaOH и растирают стеклянной палоч­кой до полного удаления комочков, затем прибавляют 8 мл воды и перемешивают. К содержимому приливают пипеткой 10 мл 0,2 н. НС1, перемешивают 5—6 мин и фильтруют через тройной бумажный складчатый фильтр диаметром 7 см.

По 0,04 мл фильтрата (70—90 мкг) наносят калиброванной мик­ропипеткой на линию старта (на 4 средние полосы) хроматографи­ческой пластинки; первую полосу оставляют контрольной; на ше­стую полосу наносят в качестве «свидетеля» 0,04 мл (80 мг) 0,2%-ного спиртового раствора цитизина-основания.

Растворы наносят полосами длиной 1—1,2 см каждая. Во время нанесения проб пластинку подсушивают теплым воздухом. Пла­стинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, затем помещают в предварительно насыщенную (не менее 2 ч) вертикальную камеру со смесью растворителей: 95%-ный эти­ловый спирт — хлороформ — концентрированный раствор аммиака (40 : 80 : 0,05) и хроматографируют восходящим методом при ком­натной температуре.

Через 1,5—2 ч, когда фронт растворителей пройдет около 16 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 3 мин и просматривают в УФ свете при длине волны 360 нм. Отмечают участки с пятнами на уровне «свидетеля». Цитизин просматривается на синем фоне пластинки в виде фиолетовых пятен. Для проверки полосу со «свидетелем» и одну полосу с испытуемым раствором про­являют реактивом Драгендорфа.

Участки сорбента с пятнами, находящимися на уровне проявлен­ного пятна цитизина (испытуемого раствора и пятна «свидетеля»), и такой же участок сорбента с контрольной полосы количественно переносят в колбы со шлифом, заливают 10 мл 95%-ного этилового спирта и встряхивают на вибрационном аппарате в течение 1 ч. Затем растворы переносят в пробирки для центрифугирования и центрифугируют 15 мин при скорости вращения 4000 об/мин или фильтруют через двойной бумажный складчатый фильтр.

Оптическую плотность полученного элюата измеряют на спек­трофотометре СФ-4А или СФ-16 в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 311 нм, используя в качестве раствора сравнения элюат с контрольной полосы.

Процентное содержание цитизина х в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле

_ 100-20-10D-1,11 • 100К D - 111 • 400/С * /л50 • V ■434 (100 — ш) ~~ mV-434 (100-И '

где 100 — объем хлороформа, взятого для извлечения суммы алка­лоидов из сырья, мл; 50 — объем хлороформного извлечения, взя­того для анализа, мл; 20 — объем солянокислого раствора суммы алкалоидов, мл; V — объем солянокислого раствора суммы алка­лоидов, нанесенного на хроматограмму, мл; 10 — объем элюата, мл; 434 —удельный показатель поглощения цитизина Епри длине волны 311 нм, полученный на приборе, использованном при раз­работке метода; т — масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %; D — оптическая плотность элюата при длине волны 311 нм; 1,11 — поправочный коэффициент на не­полное элюирование цитизина с хроматограммы; К — инструмен­тальная поправка на используемые кюветы и спектрофотометр.

Приготовление сорбента. 2 кг силикагеля марки КСК (ГОСТ 3966—76) измельчают на шаровой мельнице и переносят в бутыль вместимостью 10 л, заливают 6 л 2 н. НС1, перемешивают и оставляют на 15—20 ч, после чего НС1 сливают сифоном и силикагель промывают дистиллированной водой декан­тацией с отстаиванием в течение 7 ч до отрицательной реакции промывной воды на хлориды (проба с AgN0₃). Затем силикагель заливают таким же, количеством воды, тщательно перемешивают и через 20 мин быстро сливают суспензию в низ­кий кристаллизатор. Осевшие крупные частицы отбрасывают, суспензию после отстаивания переносят на воронку Бюхнера с тройным бумажным фильтром и промывают 3—4 раза 95%-ным этиловым спиртом. Силикагель сушат на воздухе в течение 4—5 ч, хранят в стеклянной банке с притертой пробкой.

Приготовление хроматографических пластинок. 0,3 г CaS0₄ тщательно растирают в фарфоровой ступке, прибавляют 2,7 г сили­кагеля КСК и перемешивают. Прибавляют 5 мл 0,1 н. NaOH, перемешивают пе­стиком 30—40 с, затем добавляют еще 5 мл NaOH, продолжая размешивать 30 — 40 с. Гомогенную массу, не содержащую пузырьков воздуха, наносят ровным слоем на пластинку размером 13 X 18 см и оставляют на 17—20 ч в строго гори­зонтальном положении на воздухе. Высушенную пластинку делят на 6 продоль­ных полос шириной 2 см каждая (толщина разделительных линий 1—2 мм).

Приготовление 0,2%-ного спиртового раствора ци­тизина. 0,1 г (точная навеска) цитизина-осневания (ст. 199 ГФ X) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 95%-ном этиловом спирте, до­водят спиртом до метки и тщательно размешивают.

Определение инструментальной поправки «К» н а используемый спектрофотометр и кюветы. Инструмен­тальная поправка устанавливается по дихромату калия на спектрофотометре и в кюветах, которые будут использованы при проведении анализа. Кюветы должны быть постоянными — одна для контроля, другая для используемого раствора.

10 мг (точная навеска) высушенного до постоянной массы при 105 °С дихро­мата калия растворяют в 100 мл 0,005 М H₂S0₄. Полученный исходный раствор разбавляют 0,005 М H₂S0₄ в соотношениях 1:1, 1:2; 1:3, 1.4; 1:5. Оптическую плот­ность полученных растворов определяют на спектрофотометре в кювете с тол­щиной слоя 10 мм при длине волны 311 нм. В качестве раствора сравнения исполь­зуют 0,005 М H₂S0₄. Удельный показатель поглощения (Е^) дихромата ка­лия вычисляют по формуле

, % 10VnD

-iCM _т »

где m — масса навески дихромата калия, мг; V— объем раствора, мл; п— число разведения, D— оптическая плотность дихромата калия

Инструментальная поправка К вычисляется по формуле К = 50,62/£₁'_с^/^д_К, где 50,62 — значение удельного показателя поглощения дихромата калия при длине волны 311 нм, полученное по прибору, на котором проводился анализ количественного определения дитизина при разработке метода (СФ-4А); ^'^мДК — удельный показатель поглощения дихромата калия при длине волны 311 нм по прибору, на котором проводят анализ количественного определения цитизина.

Содержание цитизина в пересчете на абсолютно сухое сырье должно быть не менее 0,6 %.

Реактивы и оборудование: хлороформ, аммиак (конц. р-р); NaOH (0,1 н.); НС1 (0,1 и.; 2 н.); этиловый спирт 95%-ный (этанол); реактив Драгендорфа; силикагель марки КСК; CaS0₄; HsS0₄, 0,005 М; вода дистиллиро­ванная; AgN0₃; цитизин; калия дихромат.

Бумага фильтровальная; колбы плоскодонные с притертой пробкой вме­стимостью 250 мл; колбы конические с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; цилиндры мерные на 10 и 100 мл; установка для отгонки хлороформа; пипетки измерительные вместимостью 1 и 2 мл; бюксы о притертой крышкой; вибра­ционный аппарат; ступки фарфоровые с пестиком; палочки стеклянные; вата гиг­роскопическая; колба Бунзена; воронки Бюхнера; воронки стеклянные для филь­трования диаметром 5 и 10 см; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X X 18 см; камера хроматографическая для ТСХ; весы лабораторные аналитиче­ские; весы ручные; сита с диаметром отверстий 1 мм; шкаф сушильный лабора­торный; УФ лампа; центрифуга лабораторная; спектрофотометры СФ-4А, СФ-16; бани водяные лабораторные; штативы для делительных воронок.

Методика количественного определения платифиллина в траве крестовника плосколистного (Herba Senecionis platyphylloidis). Кре­стовник плосколистный (Senicio platyphylloides Somm. et. Lev) сем. астровых — Asteraceae (сложноцветных — Compositae) содер­жит алкалоиды — производные пирролизидина (платифиллин, сене- цифиллин). В растительном сырье они содержатся в основном в виде N-оксидов:

сн—сн₈ сн₃ сн₃ сн—сн₃ сн₃ СН;,

0=с—G-CHr-<!:н—i—с=о о=с-с—сн_г—<h—с==о

d)HЬн

CHj—О ~ O—j---- 1---- г—сн_г—о

UJ

'NvI