Получение накопительной культуры маслянокислых клостридий

Для получения накопительной культуры обычно используют такие свойства клостридий, как способность сбраживать углеводы, анаэробность и термоустойчивость спор. Вымытый и неочищенный картофель мелко нарезают и раскладывают в физиологические пробирки на 1/3 объема, добавляют мел (для нейтрализации масляной кислоты) и заливают водопроводной водой на 3/4 объема. Пробирки прогревают на водяной бане 15 минут при 80^о С, при этом уничтожаются вегетативные клетки и нетермостойкие споры многих микроорганизмов, а также удаляется воздух из среды. Затем пробирки закрывают пробками и культивируют при 35^о С. Через 3-5 дней ломтики картофеля всплывают, наблюдается обильное газообразование, в жидкости легко обнаруживаются бактериальные клетки с плектридиальным и клостри-

диальным типом спорообразования. На картофельной среде часто выделяется C. butyricum.

Для выделения других возбудителей маслянокислого брожения используют соответствующие питательные среды. Например, накопительные культуры пектиноразрушающих бактерий (C. pectinovorum, C. felsineum) получают методом Фрибеса. Снопики из льняной соломки (или стебля крапивы) вываривают в кипящей воде в пробирке в течение 5-10 минут, чтобы удалить экстрактивные вещества. Воду сливают, снопики заливают водопроводной водой высоким слоем, кипятят 15 минут, затем охлаждают до 25-35^о С. В снопик помещают несколько соломинок льна, не подвергшихся кипячению, и культивируют при 28-30^о С. Через 3-4 суток при наличии пектинразрушающих бактерий наблюдается помутнение среды и газообразование, при этом снопик всплывает на поверхность. Для приготовления микроскопического препарата из снопика извлекают кусочек стебля и делают соскоб с поверхности скальпелем на предметное стекло в каплю воды. Характерным свойством C. pectinovorum является накопление гранулезы, которая располагается прерывисто. У C. felsineum гранулеза заполняет всю клетку, за исключением конца клетки, где располагается спора.

Образование масляной кислоты в среде обнаруживают по реакции с хлорнокислым железом: 5 мл культуральной жидкости переносят в пробирку, добавляют 2 мл 10%-го раствора хлорнокислого железа и нагревают до кипения. Образующийся раствор маслянокислого железа имеет кроваво-красный цвет.