Занятие № 10.
ТЕМА. ОКИСЛИТЕЛЬНОЕ ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ.
РЕГУЛЯЦИЯ ЦЕПИ ПЕРЕНОСА ЭЛЕКТРОНОВ
(ДЫХАТЕЛЬНЫЙ КОНТРОЛЬ).
Цель занятия: Получить представления о сопряжении биологического окисления с катаболическими и анаболическими процессами в клетке, этапах синтеза макроэргов в дыхательной цепи, значении и механизме регуляции окислительного фосфофорилирования.
Исходный уровень знаний:
- анаболизм и катаболизм как две стороны единого процесса
обмена веществ;
- состав дыхательной цепи электронов;
- структура и функция дегидрогеназ.
Содержание занятия.
I.2. Строение митохондрий.
Этапы синтеза АТФ в цепи дыхательных ферментов при окислительном фосфорилировании. Коэффициент Р/О.
Субстратное фосфорилирование, его энергетическая ценность.
Разобщение дыхания и фосфорилирования.
Регуляция тканевого дыхания.
Цикл трикарбоновых кислот (цикл Кребса) - "фокус", в котором сходятся все метаболические пути.
II.1.Работа № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТ-
ДЕГИДРОГЕНАЗЫ МЫШЦ И КОНКУРЕНТНОЕ
ТОРМОЖЕНИЕ ЕЁ АКТИВНОСТИ
Принцип метода и химизм реакции.
Сукцинатдегидрогеназа катализирует окисление (дегидрирование) янтарной кислоты в фумаровую. Коферментом служит флавинадениндинуклеотид (ФАД). В качестве акцептора водорода используется окисленная форма 2,6-дихлорфенол-индофенола (его натриевой соли), водный раствор которого окрашен в синий цвет. Восстановленная форма этого соединения бесцветна. Источником фермента служит мышечная кашица. Конкурентное торможение сукцинатдегидрогеназы вызывает малоновая кислота (НООС-СН2-СООН), являющаяся структурным аналогом янтарной кислоты.
Cl
|
HOOC-CH2-CH2-COOH + O= =N– –ONa
сукцинат | сукцинат-
Cl дегидрогеназа
Cl
|
HOOC-CH=CH-COOH + HO– –NH– –ONa
фумарат |
Cl
Порядок выполнения работы.
Свежую мышечную ткань (около 1 г) измельчить ножницами и растереть в ступке с небольшим количеством воды (2-3 мл) в течение 1 минуты. Затем мышечную кашицу перенести на двойной слой марли, помещенной на воронку, промыть водой, переложить на фильтровальную бумагу и осушить.
| Реагенты | Пробирки | ||
| опытная | опытная | контроль | |
| Фосфатный буфер (рН 7,4) | 3 мл | 3 мл | 3 мл |
| Мышечная кашица | 0,1 г | 0,1 г | 0,1 г |
| 3% раствор янтарной кислоты | 5 кап. | 5 кап. | - |
| 0,1 N раствор NаОН | 5 кап. | 5 кап. | - |
| дистиллированная Н2О | - | - | 10 кап. |
| 3% раствор малоновой кислоты | - | 5 кап. | - |
| 0,001 N раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола | 1 мл | 1 мл | 1 мл |
| Поместить в термостат при 370С на 40 минут | |||
| РЕЗУЛЬТАТЫ: |
ВЫВОД:
III.2.Контрольные вопросы.
Какую реакцию катализирует сукцинатдегидрогеназа?
Что является коферментом сукцинатдегидрогеназы?
Что является структурным аналогом янтарной кислоты, вызывающим конкурентное торможение сукцинатдегидрогеназы?
Материал для самоподготовки: I а)1. с.311-313, 345-353; II; III.
Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 757;