Идентификация извлеченных веществ

В ходе дальнейшего исследования была поставлена задача по изучению степени чистоты полученного биостимулятора после хроматографического разделения. Данное исследование было проведено для того, чтобы выяснить: содержаться ли ауксин (рис. 30) и (или) цитокинин (рис. 1) в растворе, являющимися, так же, как и фузикокцин, сильными биостимуляторами? И, если содержаться, то провести очистку раствора для устранения их влияния.

Рисунок 30 – Формула фитогормона ауксина

Для достижения этой цели было проведено спектроскопическое исследование образцов в ультрафиолетовой и видимой областях спектра, результаты которого представлены в таблице 14 и на рисунках 31, 32.

Как следует из рисунка 31, в ходе хроматографического выделения был извлечён не только фузикокцин, но и ауксин. Было предположено, что причиной недостаточной селективности сорбента является его повышенная гидрофобность (или пониженная гидрофильность). Проанализировав результаты физико-химического исследования образцов карбонизованной РШ, было принято решение повысить отношение оксида кремния к углероду за счёт использования меньшей температуры карбонизации.

Рисунок 31 – Спектр жидкости, извлеченной образцом РШ-800

Учитывая вышеперечисленные факторы, наиболее подходящим материалом оказался образец РШ-750. Результаты исследования показаны на рисунке 32.

Таблица 14 - Значения максимумов поглощения в УФ диапазоне фитогормонов и их функциональные группы

Как видно из таблицы 10 и рисунка 32 на спектре присутствует один пик в области 220 нм, принадлежащий фузикокцину, а также можно отметить отсутствие характерных для цитокинина и ауксина спектральных пиков.

Рисунок 32 – Спектр жидкости, извлеченной образцом РШ-750

Для подтверждения результатов УФ-спектроскопии был проведён элементный анализ. Элементный анализ полученного биостимулятора проводился на рентгено-анализаторе количественного содержания элементов INCA-X-RAY analytical system-Oxford (Великобритания). Для исследования был использован высушенный до воздушно-сухого состояния препарат, который прогревали в течение 12 часов при 102 °С для полного удаления следов воды и спирта. Проведённое исследование показало, что в образце содержится углерод в количестве 72,7±0,1% масс. и кислород - 24,1±0,1% масс. Особо следует отметить, что препарат совершенно не содержал даже следовых количеств азотсодержащих веществ цитокинина и ауксина (рис. 1, 30).

Кроме того, дополнительно был осуществлен масс-спектрометрический анализ. Исследование проведено сотрудниками Института биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича Российской академии медицинских наук (г. Москва) под руководством д.б.н. А.В. Лисицы. Результаты анализа приведены на рисунках 33 и 34. На масс-спектре (рис. 34) наблюдается интенсивный пик со значением m/z равным 677,1, что соответствует молекулярной массе фузикокцина. Пики со значениями 633,1 и 589,1, имеющие разницу между собой и первым пиком 44, с большой вероятностью говорят об отрыве ацетильных групп от исходной молекулы (рис. 2).

Таким образом, по результатам проведенных исследований можно сделать вывод о том, что полученный сорбент обладает высокой селективностью по отношению к фитогормону фузикокцину, а также об отсутствии в извлеченной жидкости следов цитокинина и ауксина [146], что очень важно для изучения физиолого-биохимических свойств фузикокцина [147-149].