Практическая часть. Техника сбора материала от больного для бактериологического исследования

Техника сбора материала от больного для бактериологического исследования

Выбор материала для лабораторного исследования определяется локализацией патологического процесса, особенностями патогенеза болезни и биологическими свойствами возбудителя.

Успех бактериологического исследования зависит от правильности забора материала. Патологический материал для бактериологического исследования рекомендуется брать у больного до начала специфического лечения, так как под влиянием сульфаниламидов, антибиотиков, иммунной сыворотки и других лечебных средств патогенные микробы изменяются и утрачивают способность к росту на искусственных питательных средах.

Взятие слизистого отделяемого полости носа

При взятии материала со слизистых оболочек носа, кожу в окружности наружных отверстий носа протирают ватой, смоченной 60° спиртом. После этого тампон вводят вглубь полости носа и снимают слизь со стенки носовой перегородки. Забирать материал из разных ноздрей можно одним тампоном.

Взятие слизи тампоном со слизистых оболочек зева

Больной должен широко открыть рот. Корень языка придавливают шпателем. Язык стараются придавить книзу и придвинуть кпереди. Тампон в полость рта вводят правой рукой, не касаясь поверхности языка, содержащего обильную микрофлору. Снимая налет и слизь с миндалин, дужек мягкого нёба и задней стенки глотки, обращают внимание на видимые измененные участки слизистой оболочки.

Взятие мокроты для микробиологического исследования

Для бактериологического исследования утреннюю порцию мокроты, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную склянку с хорошо подобранной пробкой. У детей, которые не умеют откашливать мокроту, искусственно вызывают кашель, раздражая корень языка тампоном.

Взятие испражнений для бактериологического исследования

Испражнения собирают в стерильные картонные тарелки или в подкладные судна и эмалированные лотки, предварительно обеззараженные раствором хлорной извести и затем многократно промытые горячей водой.

Стерильным деревянным шпателем из разных мест полученной порции кала отбирают 1—2 г испражнений, помещают их в пробирки или склянки с хорошо закрывающимися пробками. При наличии патологических включений (слизь, гной) последние обязательно вносят в посевной материал.

Патогенные кокки: стафилококки, стрептококки

Стафилококки

Материал для исследования:

1) гной из очагов поражения при гнойничковых заболеваниях кожи, фурункулах и т. д.;

2) кровь при подозрении на сепсис;

3) слизистое отделяемое зева и носоглотки при заболеваниях верхних дыхательных путей;

4) мокрота при пневмонии;

5) рвотные массы и промывные воды желудка.

Микробиологическая диагностика стафилококка

В лаборатории для диагностики стафилококковых заболеваний используют бактериологический метод исследования — посев патологического материала на питательные среды.

1-й день. 1. При исследовании гноя открытых ран, мокроты лучше всего пользоваться желточно-солевым агаром Чистовича или молочно-солевым агаром. Для засева солевых сред берется большое количество материала, который втирают в поверхность среды шпателем.

2. При посеве гноя из невскрывшихся абсцессов можно пользоваться обычным мясопептонным или 3% кровяным агаром. Исследуемый материал наносят на питательную среду в количестве 1—2 капель и затем распределяют по всей поверхности чашки. Инкубация посевов при температуре 37°С длится 18—24 часа.

2-й день. Просматривают посевы исследуемого материала на МП А, мол очно-солевом, желточно-солевом и кровяном агаре. Колонии стафилококка на плотных питательных средах круглые, слегка выпуклые, с ровными краями. По цвету колонии могут быть эмалево-белыми, лимонно-жел-тыми или золотистыми. На кровяном агаре вокруг колоний стафилококка может обнаруживаться гемолиз.

Из колонии с типичными для стафилококка признаками делают мазок для окраски по Граму. При наличии стафилококков под микроскопом видны характерные гроздевидные скопления кокков, окрашенных по Граму положительно.

3-й день. Просматривают посевы, сделанные накануне. По характеру роста на кровяном агаре стафилококки могут быть разделены на три группы. Гемолитически активные стафилококки образуют в течение 18—20 часов четкую зону гемолиза (агар становится совершенно прозрачным, бесцветным) шириной 2—3 мм. Слабо гемолитические стафилококки вызывают неполное просветление агара с шириной зоны 1—1,5 мм. Негемолитические стафилококки не изменяют кровяного агара.

4-й день. Из культур, выросших на скошенном мясопеп-тонном агаре, после предварительной проверки на чистоту, ставят реакцию плазмокоагуляции.

Техника постановки реакции плазмокоагуляции

В стерильную преципитационную пробирку наливают 0,2—0,3 мл плазмы, разведенной 1:3 — 1:5 стер, физраствором. Агаровую культуру стафилококка вносят в плазму петлей. Пробирки выдерживают при температуре 37°С в течение суток. Штаммы стафилококка, продуцирующие фермент плазмокоагулазу, вызывают свертывание плазмы, вследствие чего она превращается в желеобразную массу. Свертывание плазмы обозначается знаком плюс (+).

Стрептококки

По характеру роста на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: р-гемолитические стрептококки, а-зе-ленящие стрептококки иу-стрептококки (не вызывают гемолиза на кровяном агаре). Единственным методом дифференциации патогенных и непатогенных стрептококков является серологический метод Ленсфилд. Ленсфилд обнаружила в клеточной стенке стрептококка поверхностно расположенный группоспецифический полисахаридный антиген, который позволил разделить гемолитические и зеленящие стрептококки на 17 групп, обозначенных условно заглавными буквами латинского алфавита от А до S. Наиболее изученной является группа А, объединяющая большинство штаммов, патогенных для человека.

Патологическим материалом для исследования на стрептококки являются:

1) налет и слизь с миндалин и слизистых оболочек зева при ангине и скарлатине;

2) гной из очагов поражения;

3) кровь при явлениях септического характера.

Схема микробиологического исследования на стрептококки

1-й день: материал засевают в чашки Петри с 3%-м кровяным агаром. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С не более 20 часов.

2-й день: просматривают чашки. Штаммы стрептококков серологической группы А, наиболее патогенные для человека, могут образовывать колонии трех видов:

а) мукоидные — крупные, блестящие, вязкой консистенции; б) шероховатые — мелкие, плоские, с шероховатой поверхностью, зернистой структурой, изрезанным краем; в) гладкие — глянцевые, мелкие колонии серовато-зеленого цвета.

Из колоний с признаками, характерными для стрептококка, готовят мазки для окраски по Граму.

Колонии, окруженные зоной гемолиза, снимают петлей и пересевают в бульон Мартена.

3-й день: просматривают рост стрептококка в бульоне Мартена. В жидких питательных средах при характерном росте стрептококка бульон остается совершенно прозрачным, и только на дне и стенках пробирки образуется крошковид-ный осадок беловато-кремоватого цвета. Характер роста обусловлен длиной цепочек: чем длинней цепочки, тем лучше выражена зернистость.

Менингококки

Менингококк является возбудителем эпидемического цереброспинального менингита. Менингококки могут быть обнаружены и у здоровых людей — носителей менингококка.

При подозрении на менингит материалом для исследования служит спинномозговая жидкость (ликвор), получаемая при помощи пункции спинномозгового канала. Для микробиологического исследования требуется 5 мл ликвора.

При выявлении носителей менингококка исследуют отделяемое задней стенки носоглотки.

Исследование спинномозговой жидкости

1-й день: из ликвора, соблюдая правила стерильности, берут 1,5 мл жидкости. По внешнему виду ликвор может быть мутным или прозрачным, бесцветным или с примесью крови. Из мутного ликвора делают мазки и окрашивают их по Граму.

Ликвор засевают на питательные среды, содержащие и своем составе нативный белок. Посев производят тампонами методом отпечаток. Нанесенный таким образом материал распределяют по поверхности среды шпателем.

2-й день:

1) просматривают посевы, сделанные накануне. Колонии менингококка круглые, слегка уплощенные, голубоватого цвета, с ровными краями;

2) из колоний, внешне похожих на менингококк, берут материал для микроскопирования. Мазки окрашивают по Граму. При микроскопировании в них обнаруживаются беспорядочно расположенные кокки, неравномерно окрашенные по Граму. Такой полиморфизм характерен для менингококков, выращенных на искусственных питательных средах;

3) колонии с культуралъными признаками и мофологичес-кими свойствами, типичными для менингококка, отсеивают в одну пробирку со скошенным мясопептонным агаром и в 2—3 пробирки с сывороточным агаром. Посевы инкубируют в термостате при 37°С.

3-й день:

1) просматривают посевы. На поверхности сывороточного агара менингококки образуют нежный, влажный налет сероватого цвета;

2) с чистой культурой исследуемого микроба ставят реакцию агглютинации со специфическими агглютинирующими антименингококковыми сыворотками типов А и В (типы менингококка, имеющие преимущественное распространение на территории нашей страны). Процесс взаимодействия агглютининов с соответствующим антигеном происходит в течение 5—15 мин.

Гонококки

Гонококки являются возбудителями гонореи — гнойного воспаления слизистых оболочек мочеполового тракта и бленнореи — специфического поражения конъюнктивы глаз. Гонококки поражают только человека, животные обладают врожденной невосприимчивостью к гонококковой инфекции.

Материал для бактериологического исследования

При острой форме гонореи материалом для бактериологического исследования у мужчин служит отделяемое уретры, у женщин — отделяемое уретры, влагалища, шейки матки, которое берут тампоном из пораженного органа.

При хронической форме гонореи, а также к концу лечения острой гонореи, когда количество выделений резко уменьшается или прекращается, у мужчин исследуют сли-зисто-гнойные нити или хлопья, содержащиеся в моче.

За 2 — 3 дня до взятия материала для бактериологического исследования больному гонореей не вводят антибиотики, антисептические средства и не делают спринцевания. Патологический материал тотчас после получения засевают на питательные среды, так как гонококки очень чувствительны к температурным колебаниям, высыханию и даже в гнойном содержимом гибнут в течение нескольких часов.

Схема бактериологического исследования на гонококки

К питательным средам гонококк очень требователен. Для его выращивания применяют среды, содержащие нативный белок: человеческую кровь или сыворотку крови. Другим обязательным условием является достаточная влажность среды. Однако даже на свежеприготовленных питательных средах не всегда удается выделить культуру гонококка. 1. Микроскопия. Патологический материал, поступивший на исследование, микроскопируют. Из каждого образца материала готовят не менее двух мазков. Окраска по Граму имеет основное дифференциально-диагностическое значение для распознавания гонококка. В мазке должны обнаруживаться парно расположенные кокки бобовидной формы, обращенные друг к другу вогнутыми сторонами и не соприкасающимися между собой. В мазках, окрашенных по Граму, гонококки грам~.

2. Бактериологическое исследование патологического материала на гонококки:

1-й день: патологический материал от больного с подозрением на гонорею засевают немедленно после его получения на свежеприготовленные среды.

Материал, нанесенный на плотную питательную среду, втирают шпателем для получения изолированных колоний гонококка. Чашки с посевами помещают на 24 часа в термостат при 36—37°С.

2-й день: просматривают засеянные чашки. Колонии гонококка на поверхности питательных сред напоминают собой капельки росы, прозрачные, голубоватого цвета, с гладкой блестящей поверхностью, ровными краями.

Из колоний, характерных для гонококка, делают мазки и окрашивают их по Граму.

Дифференциальная диагностика гонококков

Гонококки приходится дифференцировать с менингококком, а также другими грамотрицательными диплококками, обитающими на слизистых оболочках верхних дыхательных путей.

При дифференциации гонококка прежде всего следует уточнить место, откуда выделен диплококк: гонококки, как отмечено выше, обнаруживаются преимущественно на слизистых оболочках мочеполового тракта, при поражении глаз — на слизистой оболочке конъюнктивы.