Окраска по Граму в модификации Берка.
| Раствор А: | |
| Кристаллический фиолетовый (с 90% содержанием сухого вещества) | 1,0 г |
| Дистиллированная вода | 100 мл |
| Раствор Б: | |
| Двууглекислый натрий | 1,0 г |
| Дистиллированная вода | 100 мл |
| Йодная протрава: | |
| Йод | 1,0 г |
| Йодистый калий | 2,0 г |
| Дистиллированная вода | 100 мл |
Протраву готовят так же, как для модификации Хукера.
| Растворитель для обесцвечивания: ( осторожно, легко воспламеняется!) | |
| Этиловый эфир | 1 объем |
| Ацетон | 3 объема |
| Дополнительный краситель: | |
| Сафранин О (с 85% содержанием сухого вещества) | 2,0 г |
| Дистиллированная вода | 100 мл |
Выполнение метода:
1. Высушенный на воздухе фиксированный нагреванием мазок погружают в раствор А, добавляют 2—3 капли раствора Б и выдерживают в течение 2 минут.
2. Отмывают мазок йодной протравой, после чего покрывают его на 2 минуты свежей протравой.
3. Мазок промывают в слабой, идущей под углом струе воды из-под крана в течение 2 с. Поверхность вокруг мазка подсушивают промокательной бумагой, но сам мазок предохраняют от высыхания.
4. На мазок при наклонном положении предметного стекла по каплям наносят обесцвечивающий растворитель до тех пор, пока в стекающем со стекла растворителе не исчезнет окраска. После этого мазок подсушивают на воздухе.
5. На 5—10 с мазок погружают в дополнительный краситель.
6. Мазок промывают в слабой, идущей под углом струе водопроводной воды до исчезновения окраски в стоке и подсушивают фильтровальной бумагой.
При использовании любой методики грамположительные бактерии окрашиваются в голубой или фиолетовый цвет, а грамотрицательные—в красный.
Грамотрицательные бактерии могут выглядеть как грамположительные, если бактериальный мазок слишком толст, а обесцвечивание не проведено до конца. В то же время грамположительные микроорганизмы могут выглядеть как грамотрицательные, если мазок чересчур обесцвечен; это особенно характерно для культур, очень долго находившихся в стационарной фазе роста. Некоторые виды рода Bacillus грамположительны лишь в течение нескольких делений после прорастания спор. Грамположительные организмы могут окраситься как грамотрицательные, если механически нарушена целостность их клеточных стенок в результате гибели клеток, автолиза, действия ферментов (например, лизоцима), высушивания на стекле и последующего увлажнения. Для получения хороших результатов лучше всего готовить относительно прозрачные мазки (со слабой замутненностью) из молодых, активно растущих культур, так как более старые культуры могут показывать неустойчивые реакции. Целесообразно в качестве контроля использовать известные грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы.
Дата добавления: 2014-12-06; просмотров: 1650;