З а д н и е 1. Влияние реакции среды содержимого рубца на жизнедеятельность инфузорий.
М а т е р и а л ь н о е о с н а щ е н и е: шприц Жанэ на 150-200 мл (1); зевник (1); зонд желудочный (1); микроскопы (150; нагревательные столики (15); колбы с воронкой и марлевой салфеткой (2); 0,05%-ный раствор NaOH (100 мл); 1,5%-ный раствор молочной кислоты (30 мл); подопытные животные: овца или 10-12 месячный теленок (1).\\
П о с т а н о в к а о п ы т а. Жизнедеятельность инфузорий изучают в содержимом рубца. Содержимое рубца получают от овец или крупного рогатого скота с помощь зонда и зевника. Удобно пользоваться деревянным зевником с отверстием посередине. Зевник фиксируют тесемками за рога или на затылочной части головы. В качестве зонда можно использовать упругий резиновый шланг нужного диаметра. Содержимое рубца через зонд набирают в шприц Жанэ. Непосредственно перед взятием или во время его содержимое фильтруют через один слой марли. Фильтрат используют в опыте. Жизнедеятельность инфузорий сохраняется в течение одних суток при содержании в термостате при 370С. Наблюдение ведут под малым увеличением микроскопа с нагревательным столиком. Готовят три висячие капли. Для этого берут три предметных стекла с луночками, вокруг которых делают ободок из вазелина. Капли делают на покровных стеклах. На три покровных стекла наносят по небольшой капле содержимого рубца. Затем на первое стекло добавляют каплю воды, на второе - каплю 1,5%-ного раствора молочной кислоты (0,17 моль/л), на третье одну каплю 0,05%-ного раствора NaOH 1,25 моль/л). Жидкости перемешивают стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой с запаянным концом. Затем каждое предметное стекло с луночкой, вокруг которой сделан ободок из вазелина, прикладывают к покровному стеклу и быстро, чтобы капля не растеклась, препарат переворачиваю вверх покровным стеклом. Тут же помещают препарат под микроскопом и наблюдают за подвижностью инфузорий до прекращения их подвижности во втором и третьем препаратах.
О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а о п ы т а. Схему постановки опыта и результаты исследований заносят в таблицу 1.
Таблица 1. Длительность жизни инфузорий в зависимости от реакции среды
| препарат | состав | Время, минут | Длительность жизни инфузорий | |
| приготовления капли | прекращения движения | |||
| 1. | Рубцовое содержимое +вода | |||
| 2. | Рубцовое содержимое +1,5% растворСН3СНОНСН3 | |||
| 3. | Рубцовое содержимое +NaOH 0,05%-ный раствор |
Анализируют экспериментальные данные, внесенные в таблицу 1, и делают выводы. Указывают влияние рН (кислотности и щелочности) на жизнедеятельность инфузорий. Объясняют, каким образом регулируется реакция среды в рубце.
В ы в о д ы:
О п ы т 2. Оценка нарушения секреторной функции желудка.
М а т е р и а л ь н о е о с н а щ е н и е: бюретки на 25 мл (15); желудочный сок от здорового животного 150 мл: желудочный сок от каждого больного животного (150 мл); с0,5%-ный раствор диметиламидоазобензола на этаноле (10 мл); 0,1 н раствор NaOH (0,1 моль/л) (100 мл); 1%-ный раствор фенолфталеина на этаноле (10 мл); раствор натрия ализаринсульфоната (10 мл); молочно-ацетатная смесь (500 мл).
П о с т а н о в к а о п ы т а. Нарушение желудочной секреции оценивают по показателям кислотности и ферментативной активности желудочного сока.
Определение свободной хлористоводородной (соляной) кислоты. В химический стаканчик вносят 5 мл профильтрованного желудочного сока, добавляют 2-3 капли 0,5%-ного раствора диметиламидоазобензола и титруют из бюретки раствором NaOH до появления желтого окрашивания. Свободная хлористоводородная (соляная) кислота выражается в единицах титра, которые соответствуют количеству миллилитров NaOH, пошедших на нейтрализацию 100 мл желудочного сока. Поэтому количество миллилитров NaOH, пошедшее на нейтрализацию 5 мл желудочного сока, умножают на 20.
Например, на титрование 5 мл желудочного сока пошло 2 мл NaOH. Содержание свободной хлористоводородной кислоты в 100 мл желудочного сока составит 2 мл •2=40 титрационных единиц.
Определение общей кислотности. К порции желудочного сока, в которой определяли количество свободной хлористоводородной кислоты, прибавляют 2 – 3 капли 1%-ного раствора фенолфталеина. Титруют из бюретки 0,1н раствором NaOH до появления розового окрашивания. Количество миллилитров NaOH, пошедшее на титрование в первом случае и во втором случае суммируют и умножают на 20. Произведение составит общую кислотность в титрационных единицах.
Например, при определении свободной хлористоводородной кислоты пошло 2 мл NaOH, а при определении общей кислотности израсходовано дополнительно 1 мл. Общая кислотность составит (2 мл + 1 мл) 20= 60 титрационных единиц.
Определение связанной кислоты. В стеклянный стаканчик вносят 5 мл новой порции профильтрованного желудочного сока и добавляют 2-3 капли индикатора – натрия ализаринсульфоната. Титруют 1 н. (0,1 моль/л) раствором NaOH до появления фиолетового окрашивания. Количество миллилитров NaOH умножают на 20. Данный индикатор выявляет все кислотореагирующие вещества в желудочном содержимом, за исключением связанной хлористоводородной кислоты. Поэтому для ее определения результат титрования с натрия ализаринсульфонатом вычитают из показателей общей кислотности.
Например, при титровании с натрия олизаринсульфонатом пошло 2,5 мл раствора NaOH. Кислотность составит 50 единиц (2,5 мл •20). При общей кислотности, равной 60 единиц, связанная хлористоводородная кислота составит 10 единиц (60-50).
Определение ферментативной активности желудочного сока по методу Пятницкого. Метод основан на створаживании молока с образованием праказеиногена молочно-ацетатной смеси, катализируемой пепсином. В пробирку вносят 0,1 мл желудочного сока. В другую пробирку наливают 5 мл молочно - ацетатной смеси, состоящей из равных объёмов всего молока и ацетатного буфера с рН=5,0 (45 граммом натрия NaOH и 92 грамма ледяной уксусной кислоты растворяют в 1 литре дистиллированной воды). Обе пробирки помещают в водяную баню температурой 350С на 5 минут для выравнивания температуры жидкостей в пробирках. Затем молочно-ацетатную смесь быстро переливают в пробирку с желудочным соком, встряхивают и одновременно включают секундомер. Держа пробирку с молочно-ацетатной смесью в бане, следят за моментом появления на стенках пробирки, которую постепенно поворачивают, первых сгустков параказеиногена. В этот момент, указывающий на завершение реакции, выключают секундомер. За единицу пепина принимают то его количество, которое свёртывает 5 мл молочно-ацетатной смеси за 60 секунд. Для расчёта единиц пепсина 1 мл желудочного сока 60 секунд делят на число секунд, полученных опыте, и частное от деления умножают на 10 (так как для опыта брали 0,1 мл желудочного сока).
Например, при исследовании желудочного сока сгустки параказеиногена появились за 30 секунд. Количество единиц пепсина в этой пробе составит (60:30)•10=20. После ознакомления с методикой определения кислотности и активности ферментов приступают к основным исследованиям. Исследуют не менее двух проб сока. Одна проба – желудочный сок от здорового животного, другая – желудочный сок от особи того же вида с желудочной патологией. В каждой пробе желудочного сока определяют содержание свободной хлористоводородной кислоты, общую кислотность, связанную соляную кислоту. Ферментативную активность (по методу Пятницкого).
Работу начинают с определения кислотности и ферментативной активности желудочного сока здорового животного, а затем по такой же схеме изучают желудочный сок животных с желудочной патологией.
О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а о п ы т а. Результаты исследования записывают в таблицу 2.
Таблица 2. Показатели кислотности и ферментативной активности у здоровых и больного животных
| Животное | Кислотность желудочного сока | Ферментативная активность в единицах пепсина | ||
| Свободная НСl | Общая НСl | Связанная НСl | ||
| 1.(здоровое) | ||||
| 2.(больное) | ||||
| 3.(больное) |
Результаты исследования желудочного сока больны животных, сравнивают с показателями, полученными в пробах сока нормальной особи. Делают выводы. В заключении и выводах отмечают отклонения кислотности и ферментативной активности сока больных животных, возможные нарушения пищеварения и эвакуации корма из желудка.
В ы в о д ы:
З а к л ю ч е н и е:
Дата добавления: 2014-12-18; просмотров: 1247;