Разделение спермы быков по полу

С 2006 года получило широкое распространение разделение спермы быков по полу (сексированная сперма).

Для заготовки сексированной спермы компания купила 12 специальных лазерных установок у американской компании Sexing Technology, Техас. Данные установки работают круглосуточно в три смены. Производительность одной установки за сутки составляет 200 доз разделенной по полу спермы.

Принцип метода разделения на X и Y- содержащие спермии основан на различии содержания ДНК в X и Y хромосомах. X-содержащие спермии животных содержат на 4-5 % больше ДНК и при использовании флуоресцентного красителя и мощного фотоумножителя с помощью проточной скоростной лазерной цитометрии возможно выделять фракции, содержащие до 92 % половых клеток с X или Y хромосомой.

В качестве флуоресцентного витального красителя используют нетоксичный краситель Hoechst 33342, Sigma-Aldrich, Munchen, Germany.

Разделяемая по полу сперма проходит через проточный цитометр под определенным давлением. При этом создаются такие условия, чтобы отдельный спермий содержался в одной капле раствора.

Лазерное приспособление улавливает разницу в интенсивности флуоресцентного свечения и заряжает капельки со спермиями отрицательным или положительным зарядом в зависимости от интенсивности свечения. После этого капельки проходят через магнитное поле и разделяются на положительно и отрицательно заряженные частицы, которые поступают в различные емкости и содержат преимущественно спермии с X или Y хромосомой. Поврежденные спермии или неокрашенные посторонние частицы имеют нейтральный заряд и поступают в отдельную емкость.

Для заготовки разделенной спермы от быка получают 2 эякулята.

Эякуляты предварительно подвергаются строгой оценке по биологическим и санитарным показателям. Они разбавляются патентованным Трис-содержащим разбавителем без желтка, в состав которого вводятся антибиотики: тилозин (100 мкг/мл), гентамицин (500 мкг/мл) и линкоспектин (300 мкг/мл). Затем добавляют специальные красители и выдерживают сперму в течение 30-45 минут при 30˚С для проникновения красителя внутрь клеток. Затем производят сортировку половых клеток с помощью проточной цитофотометрии при 18˚С. Скорость разделения клеток составляет 35 тысяч спермиев в минуту.

Ceксированную сперму замораживают в соломинках объемом 0,25 мл., содержится не менее 2 млн. подвижных спермиев быка. Кроме того, сперма, предназначенная для получения самок, замораживается в красных соломинках, а самцов - в синих соломинках. Соломинки оттаивают при 37˚С в течение 30 секунд.

Средняя оплодотворяемость сексированной спермой при однократном осеменении в течение эструса может достигать 40 %, а выход потомства желаемого пола составляет 90 %. Считается, что средняя оплодотворяемость телок сексированной спермой составляет 80 % в сравнении с оплодотворяемостью, получаемой в хозяйстве от обычной спермы при однократном осеменении.