Исследование фекалий

Метод нативного мазка. Этот метод применяется для обнаружения вегетативных форм простейших и изучения их характерных особенностей в живом состоянии. Он используется для исследования неоформленного жидкого стула. Если стул слизистый, кроваво-слизистый, кроваво-слизисто-гнойный или жидко-водянистый, то тонкой деревянной палочкой 8 – 12 см длины берут небольшой комочек слизи, помещают его на предметное стекло, покрывают покровным стеклом, слегка сдавливают и микроскопируют. Если в стуле имеется кровь, то предпочтительно брать комочек слизи, окрашенный кровью. Если стул кашицеобразной консистенции, то на предметное стекло вначале наносят каплю физиологического раствора (NaCl — 0,85%) и в нем эмульгируют фекалии. Мазок должен быть равномерно тонким, прозрачным. Толстый мазок затрудняет микроскопирование и делает почти невозможным нахождение и тем более диагностику простейших. Слишком же тонкий мазок уменьшает шансы их обнаружения. При изготовлении нативных мазков иногда используют витальные краски: нейтральный красный, метиленовый синий, эозин и др. в разведении 1:1000 и даже 1:10000, которые не оказывают вредоносного действия на паразитов, но облегчают их нахождение и наблюдение за ними.

При отсутствии на микроскопе нагревательного столика рекомендуется подогревать мазок на кисти руки или осторожно и слегка на пламени спиртовки, так как при понижении температуры мазка большинство паразитических простейших теряет подвижность, что весьма затрудняет их нахождение и определение.

Микроскопирование вначале проводят при слабом увеличении (Х80). Простейших можно заменить по более сильной преломляемости света, а некоторые виды — по их движению или изменению формы. Объект, замеченный при малом увеличении, рассматривают при увеличении 400 или 600. При отсутствии опыта просмотр мазков следует производить сразу при большом увеличении, что, однако, значительно увеличивает время на изучение препарата. Просмотр мазков при большом увеличении следует производить при более сильном освещении, регулируя его с помощью конденсора.

Дифференциальными признаками отдельных видов амеб в нативном мазке являются форма и размер тела, видимость ядра, характер образования псевдоподий, движение, деление цитоплазмы на экто- и эндоплазму, характер включений (фагоцитированные эритроциты и др.). При дифференцировке видов жгутиконосцев — размер и форма тела, количество жгутиков, характер передвижения, наличие или отсутствие ундулирующей мембраны. Специфическими признаками балантидиев являются размер, форма тела, движение, реснички, цитостом и др.

Основным отличительным признаком вегетативных форм простейших в живом состоянии служит движение. В мазках встречаются различного рода неподвижные образования — растительная клетчатка, мышечные волокна, споры, грибки и т.д. Они не должны приниматься во внимание при протозоологической диагностике.

Метод нативного мазка прост и доступен для любой лаборатории. Он позволяет при нахождении тканевых форм дизентерийных амеб с фагоцитированными эритроцитами поставить совершенно точный диагноз амебной дизентерии, а при обнаружении балантидиев и лямблий — диагноз балантидиаза и лямблиоза.

Окраска мазков раствором Люголя. Эта окраска применяется для диагностики простейших по цистам. Ею пользуются при исследовании оформленного, полуоформленного и кашицеобразного кала.

Для приготовления мазка конец деревянной палочки пачкается в фекалиях и обмывается в капле йодного раствора (J — 1,0 г, KJ — 2 г, дистиллированная вода — 100 мл), нанесенного на предметное стекло, до получения равномерной эмульсии. Препарат накрывают покровным стеклом и через 3 – 5 мин. микроскопируют. Мазок должен быть достаточно прозрачным для изучения его в проходящем свете.

Среди остатков непереваренной пищи, спор, грибков, йодофильных бактерий цисты простейших, окрашенные в коричневый или зеленовато-желтый цвет, выделяются строго определенной, характерной для каждого вида формой, размером, отчетливыми очертаниями краев, наличием гладкой, прозрачной, двухконтурной оболочки, содержимым цитоплазмы, а также наличием ядер с нечетко выраженной структурой. В цистах амеб заметны окрашенные в коричневый (темно-бурый) цвет гликогеновые вакуоли. Степень окраски этих вакуолей и очертания их границ варьируют в цистах простейших одного и того же вида в зависимости от их зрелости.