Криптоспоридиозы животных

Криптоспоридиоз – остро или подостро протекающее заболевание молодняка животных, вызываемое простейшими из рода Cryptosporidium, семейства Cryptosporidiidae, отряда Coccidiida, класса Coccidea, типа Sporozoa.

Криптоспоридиивыявлены у различных видов млекопитающих, птиц, рептилий, рыб, а также у человека. Криптоспоридиоз относится к категории зоонозов. У млекопитающих, включая человека, криптоспоридии локализуются обычно в кишечнике, но известны случаи и внекишечной локализации. Так, у поросят криптоспоридий находили в конъюнктиве глаз, в трахее, у обезьян-резусов и жеребят – в протоках поджелудочной железы.

У млекопитающих криптоспоридиоз вызывают два вида – C. parvum и C.muris. Криптоспоридии не имеют узкой видовой специфичности в отношении хозяев. Ооцистами от телят успешно заражали ягнят, козлят, крыс, мышей в возрасте от 3 до 5 дней (Heine, Boch, 1981). Криптоспоридиоз был диагностирован у 12 людей, имевших прямой контакт с телятами в период вспышки у них криптоспоридиоза (болезнь проявлялась диареей и спазмами в области живота) (Reese, 1982).

Морфология. C. parvum: Ооцисты округлой формы, с тонкой оболочкой, размером 5,4 – 6 мкм (рис. 22). Содержат 4 свободных спорозоита. Паразит локализуется в тонкомкишчнике и дыхательных путях. Развитие проходит на поверхности эпителиальных клеток.C.muris: Ооцисты размером 6 – 8 мкм и паразит находится в слизистой оболочке желудка. Речь идёт, пожалуй, о единственном паразите, который паразитирует в желудке хищных. Он считается Малопатогенным видом

Рис. 22.Ооциста Cryptosporidium parvum.

Диагностика.Комплексная, с учетом эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомического и лабораторных исследований.

Эпизоотология. Особенно часто криптоспоридиоз как ведущий фактор диареи отмечается у телят в возрасте 6-20 дней. Однако все авторы отмечают, что по достижению телятами возраста 30 дней, случаи криптоспоридиоза становятся спорадическими.

Болезнь развивается чаще всего у ослабленных животных с иммунодефицитом, а также на фермах, неблагополучных по стрептококкозам, эшерихиозу, вирусным инфекциям. Экстенсивность инвазии (ЭИ) телят может достигать 6-68%, летальность – 17-50% .

Болезнь проявляется во все сезоны года. J. Fiedler (1985) наблюдал максимальное число случаев в зимнее-весенний период, минимальное – в августе. А.В Лабинов и В.Ф. Никитин (2001) приводят другие данные для хозяйств Московской области: апрель, май и август – 66%; сентябрь – 86% (при содержании в помещении; при содержании в летнем лагере – 33%). Они отмечают, что содержание телят летом на открытом воздухе под навесом снижает ЭИ более чем в 2 раза.

Обострение эпизоотической обстановки по криптоспоридиозу в последнее время связано, вероятно, с вводом технологии содержания, при которой животные концентрируются на небольшой площади, а животноводческие помещения эксплуатируются с повышенной нагрузкой. Способствует быстрому распространению болезни в хозяйствах выделение с фекалиями больных телят уже спорулированных (инвазионных) ооцист, значительная устойчивость их во внешней среде (сохраняют жизнеспособность до 16 месяцев при температурных колебаниях, при дезинфекции обычными средствами), а также высокая интенсивность выделения (в 1г фекалий больного теленка может содержаться свыше 1 млн. ооцист).

Заразившиеся в первые дни жизни телята остаются носителями криптоспоридий до 8-ми месячного возраста. Источниками инвазии иногда могут служить взрослые коровы, обслуживающий персонал, кошки, собаки, насекомые. Источником заражения являются корм, вода, инвентарь и т.п., контаминированные возбудителями.

Для обеззараживания телятников рекомендуется применять 10% раствор формалина или 5% раствор аммиака, которые вызывают гибель ооцист за 18 ч. Также необходимо вести борьбу с крысами как с основными переносчиками и распространителями инвазии на фермах.

Криптоспоридиоз у человека – это СПИД-ассоциируемая инвазия, которая трансформирует ВИЧ-инфекцию в СПИД и нередко приводит к гибели таких больных. Если у иммунокомпетентных лиц криптоспоридиоз можно охарактеризовать как острое непродолжительное кишечное заболевание, то у лиц с иммунодефицитом – это тяжелое диарейное заболевание с хроническим течением, нередко заканчивающееся при отсутствии адекватной терапии летальным исходом.

Симптомы болезни. Первые признаки болезни наблюдают с первых дней жизни телят, далее болезнь прогрессирует, усиливается профузный понос, угнетение, отказ от корма, слабость. Фекалии животных желтые или бело-серые, водянистые вследствие нарушения всасывания, с гнилостным запахом – вследствие нарушений ферментного пищеварения. Часто в них видны прожилки крови и кусочки слизистой оболочки. При развитии болезни тенезмы могут прекращаться, фекалии вытекают самопроизвольно. Температура тела в течение болезни обычно не повышена, а при тяжелом течении – понижена.

В крови наблюдается эозинофилия, лейкопения, лимфоцитопения., снижение общего сывороточного белка и гамма-глобулинов, глюкозы.

Подострое течение, обусловленное аутоинвазией тонкостенными ооцистами, остающимися в кишечнике, носит длительный характер со стертыми клиническими признаками и приводит к задержке роста, недобору привесов и в конечном счете – к снижению продуктивных и репродуктивных качеств животных.

Патологоанатомические изменения.У больных животных в пораженном кишечнике наблюдается сплошное или очаговое катаральное воспаление слизистой оболочки, ее набухание и истончение, гиперемия, отложения фибрина и слизи, десквамация эпителия, кровоизлияния. На гистологических препаратах, приготовленных из срезов тонкого кишечника больных телят, можно видеть укорачивание, уплощение ворсинок и атрофию микроворсинок, у которых отсутствует или сильно редуцировангликокаликс. Цитоплазма энтероцитоввакуолизирована, наблюдается интра- и экстрацеллюлярный отек, инфильтрация слизистого и подслизистого слоев кишечной стенки макрофагами и нейтрофилами, диапедезные кровоизлияния из поврежденных сосудов. Кишечные железы сморщены и заполнены клеточным детритом.

Брыжеечные лимфоузлы увеличены, местами покрасневшие, на разрезе - сочные. Наблюдается прямая зависимость выраженности патологоанатомических изменений от степени поражения клеток криптоспоридиями.

Следует подчеркнуть, что похожие изменения могут быть вызваны и другими причинами поражения кишечника; патогенез собственно криптоспоридиоза мало изучен.

Лабораторная диагностика.Диагноз на криптоспоридиоз устанавливают на основании лабораторных исследований фекалий (прижизненно) и патологического материала (посмертно) с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.

Для исследования в лабораторию направляют: свежие пробы фекалий массой около 10 г из прямой кишки, взятые от 10-20 подозреваемых в заболевании животных, пробы исследуют в день отбора; пробы патматериала от трупов - соскобы и мазки-отпечатки из пораженных мест кишечника или участки тонкого кишечника, которые необходимо исследовать не позднее 6 ч после гибели животного.

Исследование фекалий.Приготовление мазка из свежих фекалий. На обезжиренное предметное стекло наносят каплю фекалий, разбавляют каплей физиологического раствора, распределяют тонким слоем (без нажима!). Полученный мазок высушивают при комнатной температуре.

Применение флотационных методов. Пробу фекалий массой 3 г помещают в стакан объемом 50 мл, заливают небольшим количеством насыщенного раствора хлорида натрия (400 г на 1 литр горячей воды, плотность раствора 1,18 г/мл) или сульфата цинка (400 г на 1 л воды, плотность раствора 1,24 г/мл) или смесью Павласека (хлорид цинка – 220 г, хлорид натрия – 210 г, вода – 800 мл). Тщательно размешивают палочкой, добавляют раствор до краев стакана, фильтруют через сито и отстаивают в течение 15-20 мин. Затем металлической петлей снимают 15-20 капель с поверхностной пленки, переносят на предметное стекло, делают тонкий мазок и высушивают на воздухе.

Применение центрифугирования в сочетании с флотацией. Пробу фекалий массой 3 г помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 15 мл воды, размешивают, фильтруют через металлическое сито, переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 1-2 мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют один из флотационных растворов, указанных выше, перемешивают и снова центрифугируют при том же режиме. Металлической петлей снимают 15-20 капель с поверхностной пленки, переносят на предметное стекло, делают тонкий мазок и высушивают на воздухе.

Фиксация мазков. На высушенный мазок наносят несколько капель этилового (метилового) спирта и фиксируют в течение 10-15 минут до полного испарения спирта. Затем мазок окрашивают одним из следующих способов.

Окраска мазков по Цилю-Нильсену.Для приготовления карболового фуксинаЦиля в ступку вносят фуксин основной – 2г, добавляют 2-3 капли глицерина, растирают, тщательно перемешивают при постепенном добавлении спирта этилового 96°- 12 мл, карболовой кислоты – 5 г и воды дистиллированной – 100мл. Раствор сливают в склянку с плотной пробкой, помещают на сутки в термостат при температуре 37°С и фильтруют через бумажный фильтр. Зафиксированные мазки окрашивают в течение 20 мин в растворе карболового фуксина, промывают в проточной воде, слегка высушивают и наносят на стекло 7-10 % раствор серной кислоты на 30-60 секунд для обесцвечивания. Затем промывают в проточной воде и докрашивают мазок 5% раствором малахитового зеленого в течение 1-2 минут.

Окраска мазков сафранином по Кюстеру.Готовят отдельно 3% раствор сафранина и 5,6% раствор КОН в дистиллированной воде. Перед применением готовят рабочий раствор: берут 5 капель свежеприготовленного раствора сафранина и смешивают с 1,5 мл раствора КОН.

Фиксированный мазок окрашивают рабочим раствором сафранина в течение 5 мин, промывают водой, обесцвечивают 0,5% раствором серной кислоты в течение 15 секунд, промывают водой, докрашивают 5% раствором малахитового зеленого на 10% этиловом спирте в течение 10-15 секунд, промывают водой, высушивают на воздухе.

Окраска мазков по Романовскому-Гимзе.Рабочий раствор краски готовят из расчета 1-3 капли готовой краски на 1 мл воды (рН=7,0-7,2). На один препарат используют 3-4 мл разведенной краски.

Окрашивают фиксированные мазки в течение 20-30 мин, после чего их промывают дистиллированной водой и высушивают.

Оценка результатов окраски. Высушенные мазки просматривают под большим увеличением микроскопа, с использованием иммерсионного объектива.

Результаты окраски:

- по Цилю-Нильсену – кислотоустойчивые ооцистыкриптоспоридий округлой формы , 4-5 мкм, ярко-красного цвета различных оттенков; они хорошо различимы на общем зеленом фоне мазка.

- по Кюстеру – ооцисты окрашиваются в бледно-розовый цвет.

- по Романовскому-Гимзе – округлые ооцисты не окрашиваются или окрашиваются слабо, внутри них по периферии заметны спорозоиты удлиненной формы, слегка изогнутые, бледно-голубого цвета с красной гранулой.

Оценка интенсивности инвазии в среднем по 10 полям зрения микроскопа:

+ - низкая (1-3 ооцисты);

++ - средняя (до 25 ооцист);

+++ - высокая (более 25 ооцист).

Исследование нативных препаратов фекалий. Применяется метод И. Павласека (1990) с применением глицерина (1). В каплю фекалий добавляют несколько капель глицерина, при этом ооцистыкриптоспоридий приобретают слегка розоватый цвет и становятся хорошо различимы. В ооцистах четко выявляются спорозоиты. Другие простейшие и частицы не обладают свойством менять свой цвет под влиянием глицерина. Следует отметить, что такая окраска ооцисткриптоспоридий может исчезнуть через 30-40 мин после приготовления нативного препарата. В связи с этим, необходимо исследовать только свежеприготовленные препараты. Исследование проводят под увеличением микроскопа 40х10.

Количественный метод диагностики криптоспоридиоза. Методика основана на способности эфира, при добавлении эфира во взвесь фекалий, просветлять взвесь, захватывая частицы детрита и жира, поднимать их на поверхность при центрифугировании. К пробе фекалий (1 мл) добавляют 5 мл 2% раствора кальцинированной соды и тщательно перемешивают, затем смесь фильтруют через металлическое сито в центрифужную пробирку, добавляют воду, доводя объем взвеси до 10 мл. Взвесь центрифугируют в течение 3 мин при 2500-3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 6-7 мл 2% раствора кальцинированной соды и 1,5-2 мл этилового эфира. Пробирку закрывают пробкой, осторожно перемешивают и центрифугируют 10 минут при 250-500 об/мин. После центрифугирования образовавшуюся в пробирке надосадочную жидкость отсасывают пипеткой до метки 1 мл. Осадок тщательно перемешивают и пипеткой из гемометра Сали быстро набирают 0,01 мл взвеси, выдувают на предметное стекло и готовят мазок. Полученный мазок высушивают, фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену. Подсчет ооцисткриптоспоридий ведут по всей поверхности мазка под большим увеличением микроскопа, с использованием иммерсионного объектива. Полученное количество ооцист умножают на 1000 и получают количество ооцист в 1 г фекалий. Для удобства подсчета ооцисткриптоспоридий мы рекомендуем применять сетку Акбаева.

Посмертная диагностика.

Посмертный диагноз на криптоспоридиоз представляет определенные сложности: в связи с мелкими размерами ооцист, их внешней схожестью на мазках-отпечатках с каплями жира, эритроцитами и др., а также быстрым аутолизом. Обязательное условие – недопущение замораживания и оттаивания проб патматериала. Мазки-отпечатки и соскобы фиксируют этанолом и окрашивают по Цилю-Нильсену, затем просматривают под большим увеличением микроскопа, с использованием иммерсионного объектива.

Дифференциальный диагноз. В исследуемых мазках ооцисты криптоспоридий следует отличать от других возбудителей, вызывающих энтериты молодняка. Ооцисты эймерий в мазках – различной формы, значительно крупнее криптоспоридий, внутри бывают различимы 4 спороцисты, содержащие по 2 спорозоита.

В связи с достаточно неспецифичными клиническими проявлениями энтерита криптоспоридиозной этиологии, его следует отличать от энтеритов инфекционной природы, определять ведущую роль возбудителей в их возникновении. Л. А. Небайкиной (2001) предложен способ ориентировочного выявления ведущего возбудителя энтерита в окрашенных по Грамму мазках-отпечатках со слизистой оболочки кишечника телят (таблица 12).

Таблица 12. Дифференциальная диагностика криптоспоридиоза по мазкам-отпечаткам со слизистой оболочки кишечника.

Лечение.До настоящего времени остается открытым вопрос специфического терапии криптоспоридиоза из-за отсутствия эффективных этиотропных препаратов, обладающих выраженным избирательным действием на криптоспоридий, хотя в ряде экспериментальных исследований были получены положительные результаты. Следовательно, при лечении данного заболевания основную роль играет патогенетическая терапия. Как зарубежными, так и отечественными исследователями рекомендовано большое количество схем лечения и применения различных препаратов для лечения криптоспоридиоза животных.

Анализ исследований работ авторов, показывает, что лечение животных при криптоспоридиозе необходимо проводить в следующих направлениях: 1. Восстановление нарушенных функции работы пищеварительного тракта. 2. Восстановление нарушенного водно-электролитного равновесия и ускорение компенсаторных процессов. 3. Восстановление иммунного статуса (иммунокоррекцию). 4. Профилактику вторичных (секундарных) инфекций и инвазий. 5. Поддерживающая терапия.

Таблица 13. Препараты для лечения криптоспоридиоза телят

Применение тех или иных лечебных препаратов для проведения патогенетической терапии в каждом конкретном случае определяется тяжестью течения заболевания, их доступностью и экономической оправданностью их использования (табл. 13).

Профилактика.Ооцисты криптоспоридий высоко резистентны к большинству дезинфектантов, используемых в домашних условиях, лечебно-профилактических учреждениях, лабораториях и системах очистки воды, включая 3% раствор гипохлорита натрия, многие препараты йода и хлора и 5% раствор формалина.