Забор материала для бактериологического исследования

При менингококковой инфекции

Показания. Обследование проводят с диагностической целью и по эпидемиологическим показаниям. С диагностической целью обследуют больных с клинически выраженной, стертой формой (назофарингит) заболевания и с подозрением на менингококковую инфекцию. По эпидемиологическим показаниям обследуют лиц, бывших в контакте с больными менингококковой инфекцией.

Аппаратура, инструментарий, медикаменты.

· исследуемый материал (ликвор, кровь, носоглоточная слизь, содержимое элементов сыпи);

· питательные среды (20 % сывороточный агар, «шоколадный» агар), среды «обогащения» – 0,1 % полужидкий агар, сывороточный агар с ристомицином или линкомицином;

· 70 % спирт, йодонат;

· чашки Петри;

· шприцы;

· набор игл. Лучше использовать стерильные иглы с коротким срезом, с мандреном, чтобы при высоком давлении спинномозговой жидкости избежать быстрого вытекания значительного ее количества и резкого падения давления. Иглу для пункции выбирают в зависимости от возраста ребенка и выраженности подкожно-жирового слоя;

· ватные шарики, салфетки, пинцет, пипетка;

· термостат, термос;

· ватный тампон, укрепленный на изогнутой проволоке.

Техника выполнения

Исследование ликвора. Люмбальную пункцию проводят натощак в процедурном кабинете или операционной. Ребенка укладывают на столе набок. Помощник фиксирует его одной рукой, сгибая голову кпереди, другой – охватывает бедра, прижимает их к животу, выгибая спину кзади.

Пункцию обычно производят между 2 и 3 или 3 и 4 поясничными позвонками. Область прокола протирают 70 % спиртом, йодонатом. Нащупывают необходимый промежуток между остистыми отростками. Пальцами левой руки фиксируют нижележащий остистый отросток, а правой рукой вводят иглу строго саггитально по средней линии – у детей раннего возраста перпендикулярно линии позвоночника, а после 10-12 лет – с легким наклоном снизу вверх. Иглу вводят медленно, преодолевая кожу, межпозвоночные связки, твердую мозговую оболочку, после чего игла как бы проваливается в спинномозговой канал. Мандрен извлекается. Первую порцию ликвора (около 1 мл) берут в отдельную пробирку для общего ликворологического исследования. Вторую порцию, предназначенную для бактериологического исследования, собирают в стерильную пробирку. При взятии ликвора нельзя касаться краев канюли иглы, краев пробирки.

Взятый материал необходимо немедленно доставить в бактериологическую лабораторию, предохраняя его от охлаждения (в термосе). Ликвор исследуют немедленно при доставке в лабораторию. Стерильной пипеткой со дна пробирки берут 0,3-0,5 мл материала и по 2-3 капли засевают на поверхность 2 чашек Петри с подогретой питательной средой, растирая шпателем. Одна чашка содержит «шоколадный агар», вторая – сывороточный. Посевы ставят в термостат при 37 ^оС и создают условия повышенного содержания СО₂ в воздухе.

Спинномозговую жидкость, оставшуюся в пробирке, используют для посева на среду обогащения (полужидкий агар), которую помещают в термостат для культивирования микробов.

На 2-й день исследования просматривают засеянные чашки. Просмотр чашек ведут визуально и с помощью бинокулярного стереоскопического микроскопа, лупы МБС. Во внимание принимают все колонии. Чашки с отсутствием роста инкубируют дополнительно одни сутки. Колонии менингококка – нежные, сероватого цвета с блестящей поверхностью и ровными краями, размерами от 0,1 до 3,0 мм. Если число выросших колоний мало
(1-2), то их отсевают на чашку с сывороточным или «шоколадным» агаром для накопления микробной массы, а идентификацию микроба проводят еще через одни сутки. Если прямой посев на чашки с питательной средой не дал роста колоний, то делается высев на чашки с сывороточным и «шоколадным» агаром из инкубированной в термостате смеси ликвора с полужидким агаром (среда обогащения). При отрицательных результатах высев со среды обогащения повторяют через 1-2 дня в течение 7 дней инкубации в термостате.

Культуру менингококков, выросшую на сывороточном агаре при температуре 37 ^оС, можно использовать для серологической идентификации менингококков в реакции агглютинации или преципитации, а также для определения лекарственной устойчивости.

Исследование крови. В качестве экспресс-метода диагностики рекомендуется приготовление мазка «толстой капли» из крови, взятой из вены или пальца.

Несколько капель крови, взятой стерильно (над пламенем горелки) засевают на чашки с вышеуказанными питательными средами, а затем на 0,1 % полужидкий агар в отношении 1:10. После суточной инкубации материал высевают на чашку Петри. При отрицательном результате рекомендуется инкубация в течение недели с ежедневными или через день высевами.

Исследование носоглоточной слизи. Слизь берут с задней стенки глотки натощак стерильным ватным тампоном, укрепленным на изогнутой под углом 120^о проволоке. Материал берут с обязательным надавливанием шпателем на корень языка. Тампон вводят концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2-3 раза по задней стенке. При извлечении тампон не должен касаться зубов, слизистой щек, языка, язычка.

Материал может быть засеян на месте его взятия на чашку Петри с питательной средой или погружен в пробирку с транспортной средой, средой обогащения. При посеве на чашку материал втирают по поверхности небольшого участка (1х2 см) среды всеми сторонами тампона, затем этим же тампоном засевают штрихами (с отрывом) по всей площади, отведенной для посева. Для подавления роста грамположительных кокков используют сывороточный агар с добавлением в него антибиотиков (ристомицина или линкомицина). Засеянные чашки доставляют в лабораторию в термостате при температуре 35-40 ^оС и немедленно помещают в термостат при температуре 37 ^оС.

Тампоны с исследуемым материалом погружаются в среду обогащения и с соблюдением температурного режима доставляются в лабораторию. Там они помещаются в термостат для подращивания флоры.

На следующий день чашки просматриваются визуально и под лупой-микроскопом. Для дальнейшего исследования на менингококки оставляют только непигментированные культуры, дающие нежный влажный рост. Из них готовят мазки, проводят микроскопию чистой культуры.

Исследование экссудата из элементов сыпи. Вначале обтирается кожа вокруг геморрагического элемента спиртом. Экссудат можно взять прокаленной и остуженной бактериологической петлей из некротизированных участков. При неповрежденной коже экссудат берут стерильной тонкой иглой, соединенной со шприцем, в котором имеется 0,1-0,2 мл физиологического раствора. Физраствор вводят в толщу элемента сыпи и отсасывают обратно.

Посев экссудата производят в чашки Петри с сывороточным агаром, содержащим антибиотики ристомицин или линкомицин. Из остатка экссудата готовят препараты – мазки.

Засеянные чашки инкубируют при 37 ^оС 24 ч (в случае отсутствия роста – 48 ч). Подозрительные на менингококки колонии отсевают и изучают под микроскопом.

Противопоказания к проведению люмбальной пункции.

– свежее оболочечное или мозговое кровоизлияние;

– опухоль задней черепной ямки.

Естественные реакции на процедуру. После пункции в некоторых случаях наблюдаются явления менингизма: головная боль, тошнота, головокружение, иногда легкая ригидность затылочных мышц. Она обычно наступает на второй день и держится 3-8 дней. Это чаще всего связано с потерей ликвора, вследствие вытекания его через пункционное отверстие, которое закрывается только через 3-4 дня.

Возможные нежелательные последствия. Наиболее опасным осложнением, угрожающим жизни больного, является вклинение ствола мозга в большое затылочное отверстие. Чтобы этого не случилось, жидкость следует выводить медленно, и не более 3-5 мл в зависимости от возраста больного и давления ее в спинномозговом канале.