Качественная реакция на молочную кислоту

Принцип метода: молочная кислота в присутствии фенолята железа (реакция Уффельмана), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета.

Ход исследования. Мышцы измельчают ножницами и растирают 1 грамм их в ступке в течение 3 минут, прибавив 5 капель воды до получения гомогенной массы. Затем приливают 3 мл воды, перемешивают, сразу же фильтруют через смоченную водой вату, 25 капель фильтрата добавляют по каплям к реактиву Уффельмана (20 капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа до появления фиолетового цвета). В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельмана с раствором молочной кислоты и наблюдают появление желто-зеленого окрашивания.

Тема 3.2. ЦИКЛ ТРИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ.

Вопросы для самоподготовки.

1. Перечислите вещества, в которые непосредственно превращается пировиноградная кислота.

2. Как называется процесс превращения пировиноградной кислоты в ацетил-КоА?

3. Назовите фермент, осуществляющий превращение пировиноградной кислоты в ацетил-КоА.

4. Назовите ферменты, участвующие в окислительном декарбоксилировании пировиноградной кислоты.

5. Напишите реакцию окисления пировиноградной кислоты до ацетил-КоА. Напишите схему цикла Кребса.

6. Назовите фермент, катализирующий взаимодействие щавелево-уксусной кислоты с ацетил-КоА.

7. Напишите реакцию синтеза лимонной кислоты.

8. Напишите реакцию образования изолимонной кислоты.

9. Какой фермент участвует в дегидрировании изолимонной кислоты?

10. Напишите реакцию образования α-кетоглутаровой кислоты.

11. Какие коферменты участвуют в дегидрировании α-кетоглутаровой кислоты?

12. Напишите реакцию образования сукцинил-КоА.

13. Как называется реакция превращения α-кетоглутаровой кислоты в сукцинил-КоА?

14. Назовите фермент, катализирующий превращение α-кетоглутаровой кислоты в сукцинил-КоА.

15. Назовите и напишите этап цикла трикарбоновых кислот, где протекает реакция субстратного фосфорилирования.

16. Напишите реакцию цикла трикарбоновых кислот, катализируемую сукцинатдегидрогеназой.

17. Назовите кофермент, участвующий в дегидрировании янтарной кислоты.

18. Напишите реакцию образования малата (яблочной кислоты).

19. Напишите реакцию дегидрирования малата.

20. Назовите фермент, участвующий в дегидрировании малата.

21. Назовите кофермент, входящий в состав малатдегидрогенезы.

22. Напишите формулы субстратов цикла трикарбоновых кислот, окисляемые НАД-зависимыми дегидрогеназами.

23. Проследите путь водорода от окисляемых НАД-зависимых субстратов к кислороду и оцените выход АТФ для каждой реакции.

24. Напишите формулу субстрата цикла трикарбоновых кислот, окисляемого ФАД-зависимой дегидрогеназой.

25. Проследите путь водорода от окисляемого ФАД-зависимого субстрата к кислороду и оцените выход АТФ для каждой реакции.

26. Сколько молей АТФ образуется при окислении 1 моля ацетил-КоА в цикле Кребса?

27. Сколько молей АТФ образуется при окислении 1 моля пировиноградной кислоты до углекислого газа и воды?

28. Сколько молей АТФ образуется при полном окислении глюкозы до углекислого газа и воды?

29. Сколько молей АТФ образуется непосредственно в цикле Кребса?

30. Может ли цикл Кребса протекать в анаэробных условиях? Ответ поясните.

31. Где в клетке локализованы ферменты цикла трикарбоновых кислот?

32. Может ли работа цикла трикарбоновых кислот не сопровождаться синтезом АТФ?

33. Дайте определение субстратного и окислительного фосфорилирования; укажите принципиальные различия этих процессов. Приведите примеры.

34. Биологическая роль цикла трикарбоновых кислот.

Вопросы, задачи и упражнения для самоконтроля

1) Укажите биологическую роль цикла трикарбоновых кислот.

2) Укажите этап цикла трикарбоновых кислот, где происходит субстратное фосфорилирование.

3) Назовите фермент цикла трикарбоновых кислот, катализирующий этап субстратного фосфорилирования:

1) α-кетоглутаратдегидрогеназа;

2) сукцинатдегидрогеназа;

3) сукцинил-КоА-синтетаза;

4) малатдегидрогеназа.

4) Назовите реакцию, являющуюся началом цикла Кребса:

1) пируват оксалоацетат;

2) пируват ацетил-КоА;

3) ацетил-КоА цитрат;

4) ацетил-КоА ацетоацетил-КоА.

5) В процессе окислительного декарбоксилирования образуется _________.

6) Назовите соединения, имеющие макроэргическую связь:

1) АДФ;

2) глюкозо-6-фосфат;

3) фосфоенолпируват;

4) АТФ;

5) сукцинил-КоА.

7) Сколько АТФ образуется в цикле трикарбоновых кислот в процессе субстратного фосфорилирования?

8) Сколько АТФ образуется при окислении 1 моль пирувата до углекислого газа и воды?

Литература

1. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: Высшая школа, 1989. –
С. 212-222.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1990. – С. 345-353.

3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 259-267.

4. Задания на самоподготовку по биологической химии.

5. Задания для самостоятельной работы студентов лечебного и медико-профилактического факультетов.

6. Тестовые задания по биохимии.

7. Лекционный материал.

8. Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С.

9. Лабораторная работа: