Основы количественного определения активности ферментов
1. Активность фермента выражается в скоростинакопления продукта или скорости убыли субстрата в пересчете на количество материала, содержащего фермент.
В практике обычно используют:
· единицы количества вещества – моль (и его производные ммоль, мкмоль), грамм (кг, мг),
· единицы времени – минута, час, секунда,
· единицы массы или объема – грамм (кг, мг), литр (мл).
Активно используются и другие производные – катал (моль/с), международная единица активности (МЕ, Unit) соответствует мкмоль/мин.
Таким образом, активность фермента может выражаться, например, в ммоль/с×л, г/час×л, МЕ/л, кат/мл и т.д.
Например, известно,
· что 1 г пепсинарасщепляет 50 кг яичного белка за один час – таким образом, его активность составит 50 кг/час на 1 г фермента,
· если 1,6 мл слюны расщепляет 175 кг крахмала в час – активность амилазы слюнысоставит 109,4 кг крахмала в час на 1 мл слюны или 1,82 кг/мин×г или 30,3 г крахмала/ с×мл.
2. Создание стандартных условий, чтобы можно было сравнивать результаты, полученные в разных лабораториях – оптимальная рН и фиксированная температура, например, 25°С или 37°С, соблюдение времениинкубации субстрата с ферментом.
3. Необходимо наличие избытка субстрата, чтобы работали все имеющиеся в растворе молекулы фермента.
От чего зависит активность ферментов?
Дата добавления: 2015-06-27; просмотров: 875;