Забор, хранение и транспортировка материала
В табл. 9 суммированы данные о заборе, хранении и транспортировке крови для определения вирусологических и иммунологических показателей при ВИЧ-инфекции.
Таблица 9 – Данные о заборе, хранении и транспортировке крови для исследований
| исследование | объем крови | анти-коагулянт | подготовка пробы | хранение и транспортировка |
| Количество CD4 лимфоцитов | 3-5 мл | ЭДТА | перемешать** и закрыть | до 4 часов при комнатной tо (не в холодильнике!) |
| Качественное определение ВИЧ | 1-2 мл | ЭДТА * | перемешать** и закрыть | до 4 суток при +2+8оС (не замораживать!) |
| Вирусная нагрузка или определение лекарственной резистентности | 2-3 мл | ЭДТА * | перемешать и закрыть | до 6 ч при +2+8оС |
| выделить плазму – центрифугирование со скоростью 80-100 оборотов/мин в течение 20 мин | до 1 суток при +2+8оС, при заморозке: -20оС – 1 месяц -80оС – 6 месяцев |
* нельзя добавлять такие антикоагулянты как гепарин и цитрат натрия, так как они ингибируют ПЦР
** перемешивание необходимо для недопущения образования сгустка, но оно должно быть аккуратным, чтобы не привести к разрушению клеток крови
Оптимально, когда забор крови происходит непосредственно рядом с лабораторией, которая будет выполнять исследования, поскольку длительность и условия хранения и транспортировки материала могут повлиять на результат. Длительность и условия хранения наиболее лимитированы при исследовании образцов крови на количество CD4 лимфоцитов и вирусную нагрузку.
Хранить кровь для определения количества CD4 лимфоцитов допустимо до 4 часов при комнатной температуре, поскольку при более длительном хранении или при хранении при более низкой температуре происходит разрушение клеток крови, и результат теста будет искусственно занижен. Имеется методика пересчета результатов теста с использованием поправочных коэффициентов на «старение крови» при ее хранении, но все же более достоверный результат будет получен при постановке теста в те сроки от забора крови, которые оговорены инструкцией. Клетки крови могут быть также разрушены при неаккуратном перемешивании и небрежной транспортировке.
Хранить цельную кровь для определения вирусной нагрузки можно также недолго – до 6 часов при температуре холодильника, поскольку содержащиеся в плазме человека РНК-азы будут постепенно разрушать РНК ВИЧ, и вирусная нагрузка при длительном хранении крови будет снижаться. При необходимости более длительного хранения следует отцентрифугировать кровь, отделить плазму и заморозить ее.
Кровь, забранную для качественного определения ВИЧ (в ДНК ПЦР), не следует замораживать, поскольку будут разрушены лимфоциты, в которых и находится интегрированная ДНК ВИЧ. При необходимости длительного хранения крови следует отцентрифугировать ее, отделить монослой лимфоцитов и заморозить.
Дата добавления: 2015-05-30; просмотров: 1111;