Забор, хранение и транспортировка материала

В табл. 9 суммированы данные о заборе, хранении и транспортировке крови для определения вирусологических и иммунологических показателей при ВИЧ-инфекции.

 

Таблица 9 – Данные о заборе, хранении и транспортировке крови для исследований

исследование объем крови анти-коагулянт подготовка пробы хранение и транспортировка
Количество CD4 лимфоцитов 3-5 мл ЭДТА перемешать** и закрыть до 4 часов при комнатной tо (не в холодильнике!)
Качественное определение ВИЧ 1-2 мл ЭДТА * перемешать** и закрыть до 4 суток при +2+8оС (не замораживать!)
Вирусная нагрузка или определение лекарственной резистентности 2-3 мл ЭДТА * перемешать и закрыть до 6 ч при +2+8оС  
выделить плазму – центрифугирование со скоростью 80-100 оборотов/мин в течение 20 мин до 1 суток при +2+8оС, при заморозке: -20оС – 1 месяц -80оС – 6 месяцев

* нельзя добавлять такие антикоагулянты как гепарин и цитрат натрия, так как они ингибируют ПЦР

** перемешивание необходимо для недопущения образования сгустка, но оно должно быть аккуратным, чтобы не привести к разрушению клеток крови

 

Оптимально, когда забор крови происходит непосредственно рядом с лабораторией, которая будет выполнять исследования, поскольку длительность и условия хранения и транспортировки материала могут повлиять на результат. Длительность и условия хранения наиболее лимитированы при исследовании образцов крови на количество CD4 лимфоцитов и вирусную нагрузку.

Хранить кровь для определения количества CD4 лимфоцитов допустимо до 4 часов при комнатной температуре, поскольку при более длительном хранении или при хранении при более низкой температуре происходит разрушение клеток крови, и результат теста будет искусственно занижен. Имеется методика пересчета результатов теста с использованием поправочных коэффициентов на «старение крови» при ее хранении, но все же более достоверный результат будет получен при постановке теста в те сроки от забора крови, которые оговорены инструкцией. Клетки крови могут быть также разрушены при неаккуратном перемешивании и небрежной транспортировке.

Хранить цельную кровь для определения вирусной нагрузки можно также недолго – до 6 часов при температуре холодильника, поскольку содержащиеся в плазме человека РНК-азы будут постепенно разрушать РНК ВИЧ, и вирусная нагрузка при длительном хранении крови будет снижаться. При необходимости более длительного хранения следует отцентрифугировать кровь, отделить плазму и заморозить ее.

Кровь, забранную для качественного определения ВИЧ (в ДНК ПЦР), не следует замораживать, поскольку будут разрушены лимфоциты, в которых и находится интегрированная ДНК ВИЧ. При необходимости длительного хранения крови следует отцентрифугировать ее, отделить монослой лимфоцитов и заморозить.








Дата добавления: 2015-05-30; просмотров: 1107;


Поиск по сайту:

При помощи поиска вы сможете найти нужную вам информацию.

Поделитесь с друзьями:

Если вам перенёс пользу информационный материал, или помог в учебе – поделитесь этим сайтом с друзьями и знакомыми.
helpiks.org - Хелпикс.Орг - 2014-2024 год. Материал сайта представляется для ознакомительного и учебного использования. | Поддержка
Генерация страницы за: 0.003 сек.