Генетические методы

Характеристика методов. Определяют генетические маркеры резистентности.

Особенности методов. Используют ПЦР, ПЦР-ПДРФ, ДНК-гибридизацию, секвенирование.

Техника проведения. Выделяют ДНК из материала от больных или из чистой культуры микроорганизмов. Проводят генетические исследования. Проводят сравнение с данными фенотипического анализа.

Принцип методов.У резистентных микроорганизмов присутствуют гены, контролирующие синтез ферментов, разрушающих антибиотики. У некоторых микроорганизмов резистентность связана с мутациями в генах, кодирующих структуры, на которые действует антибиотик. Изменение мишени приводит к резистентности (рис. 48).

Оценка чувствительности.Выявление у микроорганизма генетических маркеров резистентности свидетельствует о потенциальной устойчивости к антибиотику.

Оценка методов. Перспективны. На практике используются для диагностики антибиотикорезистентности микобактерий туберкулеза, а также для изучения генетических механизмов устойчивости в рамках регионального или национального мониторинга антибиотикорезистентности.

 

Рис. 48. Hain тест (реакция гибридизации на мембранах) для определения устойчивости к противотуберкулезным препаратам Mycobacterium spp. (на каждой тест-полоске верхние три горизонтальны полосы являются контролем, остальные свидетельствуют о видовой принадлежности и наличии мутаций в rpoB гене, обуславливающих устойчивость к рифампицину)

 

Выявление генетических маркёров резистентности целесообразно в тех случаях, когда традиционные фенотипические методы определения чувствительности микроорганизмов неприменимы или недостаточно эффективны. Например, определение чувствительности Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам с помощью культуральных методов занимает 4-8 нед. Кроме того, результаты фенотипических тестов могут быть искажены в связи со снижением активности антимикробных препаратов в процессе длительного культивирования микроорганизмов.

Факторы, влияющие на результаты определения антибиотикорезистентности:

1) состав питательной среды:

- содержание ионов Са2+ (не более 20-25 мг/л) и Mg2+ (не более 10-12,5 мг/л). Эти ионы инактивируют некоторые антибиотики (тетрациклины), при этом МИК антибиотика повышается;

- содержание тимина, тимидина, инактивирующих сульфаниламиды и триметоприм,

- рН среды (рис. 49).

 

Рис. 49. Влияние рН среды на диметры зон задержки роста некоторых антибиотиков

 

2) величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):

- культуры, длительное время хранившиеся на плотных или жидких питательных средах, обладают пониженными ростовыми свойствами, поэтому для оценки чувствительности необходимо использовать микроорганизмы, инкубировавшиеся не более 16-18 часов;

- увеличение концентрации инокулята с 105 КОЕ/мл до 107 КОЕ/мл может приводить к повышению МПК;

3) условия инкубации:

- изменение температуры инкубации может привести к торможению либо к увеличению скорости роста, поэтому посевы инкубируют при 350С;

- преждевременный или поздний учет результатов может привести к ошибочной оценке результатов, поэтому учёт проводят через 18-24 часа инкубации.

Причины несовпадений результатов определения активности препарата in vitro и его клинической эффективностью в лечении пациентов:

1) отсутствие адекватного хирургического лечения;

2) общее состояние пациента (возраст, питание, сопутствующие заболевания);

3) несвоевременное назначение антимикробной терапии;

4) низкая биодоступность препарата;

5) невозможность достижения бактерицидной концентрации в воспалительном очаге;

6) инактивация микробными ферментами.








Дата добавления: 2015-02-23; просмотров: 1172;


Поиск по сайту:

При помощи поиска вы сможете найти нужную вам информацию.

Поделитесь с друзьями:

Если вам перенёс пользу информационный материал, или помог в учебе – поделитесь этим сайтом с друзьями и знакомыми.
helpiks.org - Хелпикс.Орг - 2014-2024 год. Материал сайта представляется для ознакомительного и учебного использования. | Поддержка
Генерация страницы за: 0.005 сек.