Ориентировочная реакция агглютинации

Ориентировочную реакцию агглютинации ставят на пред­метном стекле. Наносят пастеровской пи­петкой каплю физиологического раствора, затем в ней тщательно размешивают небольшое количество куль­туры до получения гомогенной взвеси бактерий. Если отсутствует реакция самооглютинации, продолжают исследование. Рядом с первой каплей наносят каплю сыворотки в разведении 1 : 10, 1 : 20 и смешивают обе капли. Через несколько минут в случае положительного результата наблюдается образование агглютината , которое еще ускорится, если слегка пока­чивать стекло

2. Реакция развернутой агглютинации с целью серотипирования E. сoli

Применяется для подтверждения результатов ориентировочной реакции агглютинации с моновалентными сыворотками.

Сначала готовят основное разведение взвеси микроорганизмов (1:50). из которого делают серию разведений путем последовательного переноса 0,5 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда (0,5 + 0,5 физраствора). Из последней пробирки 0,5 мл разведенной взвеси удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль антигена) вносят 1 мл изотонического раствора хлорида натрия.

В каждую пробирку с разведениями и в контрольную пробирку вносят пастеровской пипеткой по 2 капли моновалентной сыворотки. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37°С на 2 ч, затем сутки выдерживают при комнатной температуре.

Учет реакции развернутой агглютинации производят, оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном встряхивании. В контрольных пробирках агглютинации не должно быть. Интенсивность реакции агглютинации отмечают следующими знаками: "++++" — полная агглютинация (хлопья агтлютината в абсолютной прозрачной жидкости), "+++" — неполная агглютинация (хлопья в слабоопалесцирующей жидкости), "++" — частичная агглютинация (хлопья четко различимы, жидкость слегка мутная), "+" — слабая , сомнительная агглютинация (жидкость очень мутная, хлопья в ней плохо различимы), "—" — отсутствие агглютинации (жидкость равномерно мутная).

Контрольные вопросы:

1.Какими свойствами обладают антигены?

2.Какие виды антител Вы знаете?

3.Назовите стадии антителообразования

4.Каков механизм реакций иммунитета.

5.Перечислите виды реакций аглютинации.

6.Охарактеризуйте основные способы получения иммунных сывороток.

Список литературы:

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема № 4: ИММУНИТЕТ: ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ПАМЯТЬ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ.ТРАНСПЛАНТАЦИОННЫЙ ИММУНИТЕТ.ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ.

Цель: Познакомиться с механизмами иммунологической памяти и толерантности. Изучить особенности трансплантационного иммунитета. Научиться ставить реакцию Видаля, РНГА. Уметь интерпретировать результаты реакций.

Вопросы для самоподготовки:

1. Иммунологическая память.

2. Иммунологическая ареактивность

3. Иммунологическая толе­рантность.

4. Трансплантационный иммунитет.

5. Реакции агглютинации (РА ). Нагрузочные реакции. РНГА

6. Критерии серодиагностики: дигностический титр, нарастание титра антител.

7. Применение реакций АГ+АТ в диагностике: изучение антигенного состава микроорга­низмов (серотипирование), экспрессдиагностика, индикация антигенов в объектах внешней среды, серодиагностика.

План:

Программа:

1. Иммунологическая память и толерантность

2. Трансплантационный иммунитет

3. Критерии серодиагностики

3. Реакции агглютинации (РА) для серодиагностики брюшного тифа

4. Нагрузочные реакции. РНГА

Демонстрация:

1. Диагностические препараты для выявления антител (диагностикумы).

2. Результаты постановки реакции агглютинации по Видалю.

3. Результаты постановки РНГА.

Задание студентам:

1. Поставить развернутую реакцию агглютинации для определения титра антител к возбудителю брюшного тифа. Протоколировать и оценить результаты реакции.

2. Поставить РНГА с целью серодиагностики. Оценить результаты РНГА, поставленной с целью серодиагностики.