Количественное определение общего белка сыворотки крови по биуретовой реакции

Белки сыворотки крови при взаимодействии с сульфатом меди в щелочной среде образуют за счет своих пептидных связей комплексные соединения с ионами меди фиолетового цвета. Интенсивность окрашивания раствора находится в прямой зависимости от концентрации в нем белка.

К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 5,0 мл рабочего раствора биуретового реактива. Одновременно ставят контроль. К 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия прибавляют 5 мл рабочего биуретового реактива. Через 30 минут измеряют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 540-560 нм (зеленый светофильтр) против контроля.

Для построения калибровочного графика из стандартного 5% раствора белка готовят рабочие стандартные растворы, как указано в таблице 8. Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и прибавляют по 5 мл рабочего биуретового реактива; через 30-60 минут измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре против контроля. По полученным данным строят калибровочный график. Норма - 6,5-8,5% белка. При содержании белка в сыворотке больше 10% сыворотку разводят физиологическим раствором, а результаты умножают на коэффициент разведения.

Таблица 8. Состав смесей для построения калибровочного графика.