Определение протеолитической активно­сти микробов

а) На желатине. Мясо-пептонный желатин разливают в пробирки столбиком по 5— 6 мл. Посев производят уколом, погружая петлю с исследуе­мой культурой в глубь питательной среды до дна пробирки. Микробы, способные расти при низкой температуре, остав­ляют стоять в комнате при 20—22°С. Остальные посевы ин­кубируют в термостате при 37°С. Вместе с опытными про­бирками в термостат ставят одну или две пробирки с неза­сеянным желатином для контроля. При температуре 37°С желатин плавится, поэтому после инкубации пробирки, вы­нутые из термостата, опускают в холодную воду или ставят в холодильник. После застудневания желатина в контроль­ных пробирках приступают к просмотру роста и учету изме­нений в питательной среде опытных пробирок. Там, где под действием фермента желатиназы произошло расщепление белков желатина, отмечается разжижение питательной сре­ды. Пробирки, в которых после суточного инкубирования среда остается без изменения, оставляют в термостате. Наблю­дение за изменением среды ведется в течение 20 суток. В прото­коле исследования обязательно отмечают день появления признаков разжижения среды, степень и характер ее разжи­жения.

б) На молочном агаре Эйкмана. Молочный агар Эйкмана, разлитый и остуженный в чашках Петри, засевают исследуемой культурой микробов. Посев делают петлей или шпателем так, чтобы получить изолированные ко­лонии. Через 24—48 ч инкубации в термостате культуры, продуцирующие протеолитический фермент, обусловливают пептонизацию молочного белка — казеина, в результате чего вокруг таких колоний образуются прозрачные зоны, четко выделяющиеся на общем молочно-мутном фоне среды.

в) На свернутой кровяной сыворотке. Куль­туру исследуемых аэробных микробов засевают на чашки, анаэробных — уколом в столбик свернутой лошадиной сыво­ротки, инкубируют в термостате при 37°С. Штам­мы, продуцирующие протеолитические ферменты, разжижая питательную среду, образуют углубления вокруг колоний или на поверхности столбика среды.

г) В бульоне с куриным яичным белком. В пробирку с мясо-пептонным бульоном или бульоном Хоттингера, содержащим кусочек свернутого куриного белка, вносят одну петлю исследуемой культуры микроба. Посевы просматривают ежедневно в течение 5 дней. Протеолитически активные культуры микробов расщепляют коагу­лированный яичный белок; кусочки белка, содержавшиеся в среде, заметно уменьшаются в размере, превращаясь в крошкообразную массу, или полностью растворяются.

Аналогичным образом проявляются протеолитические свойства микробов в средах с кусочком вареного мяса.

Некоторые виды патогенных микробов с выраженной про­теолитической активностью обладают способностью расщеп­лять белок и пептон до продуктов глубокого распада: индо­ла, сероводорода, мочевины и аммиака.

При определении видов и дифференциации разновидно­стей патогенных микробов наибольшее значение имеет выяв­ление двух первых продуктов: индола и сероводорода.